本文關(guān)鍵詞：抗TRAIL單克隆抗體的性質(zhì)研究及抗原表位鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-induced ligand, TRAIL)是TNF超家族成員。與以往細(xì)胞因子配體相比,TRAIL不僅對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有很強(qiáng)的誘導(dǎo)凋亡作用,而且具有能選擇性介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而對(duì)大多數(shù)正常組織和細(xì)胞無損傷的功能。正因?yàn)槿绱?TRAIl已成為腫瘤治療研究的熱點(diǎn)。在TRAIL的研究過程中,高效的單克隆抗體是必不可少的。本論文主要研究了實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建、純化得到的抗TRAIL單克隆抗體Abl和Ab2。本論文首先對(duì)這兩株抗體的基本理化特性進(jìn)行了鑒定：經(jīng)SDS-PAGE鑒定可知,兩株抗體的相對(duì)分子質(zhì)量為150kd(其中輕鏈為25kd,重鏈為55kd)；使用間接ELISA檢測(cè)表明,Ab1和Ab2腹水的效價(jià)為1×10-6；使用Ig亞類ELISA試劑盒測(cè)定Abl和Ab2的亞類可知,其Ig亞類為IgGl9(γ)；使用ITC技術(shù)對(duì)Abl和Ab2的親和常數(shù)檢測(cè)可知,它們的親和常數(shù)分別為2.61×10-i-M和2.39×10-10M。通過ELISA實(shí)驗(yàn),我們確定所制備的兩株都能夠特異性地與TRAIL相結(jié)合,并且具有較強(qiáng)的中和TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力。上述數(shù)據(jù)都表明：我們制備的抗TRAIL單克隆抗體具有較高的親和力、且具有中和TRAIL的性能。本論文還通過噬菌體展示技術(shù)確定了與我們所制備TRAIL抗體結(jié)合的TRAIL蛋白的抗原決定簇位點(diǎn)。這些為以后TRAIL的檢測(cè)和臨床治療應(yīng)用奠定了良好的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：TRAIL 單克隆抗體 噬菌體展示 分子模擬
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 第一部分 抗TRAIL單克隆抗體的性質(zhì)研究8-22
• 前言8
• 1. 儀器及材料8-11
• 1.1 儀器8
• 1.2 試劑8-9
• 1.3 常用試劑配制9-11
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法11-15
• 2.1. SDS-PAGE11-12
• 2.2. ELISA測(cè)定單克隆抗體的滴度12-13
• 2.3. ELISA對(duì)Ab1和Ab2特異性的檢測(cè)13
• 2.4. 細(xì)胞流式法13-14
• 2.5. MTT14
• 2.6. Western Blot14-15
• 2.7. ITC15
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果15-22
• 3.1. Ab1和Ab2理化性質(zhì)鑒定15-17
• 3.2. Ab1和Ab2具有較好的TRAIL特異性17-18
• 3.3. Ab1和Ab2對(duì)TRAIL所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用具有較強(qiáng)的中和效應(yīng)18-22
• 第二部分 TRAIL單克隆抗體抗原表位鑒定22-35
• 前言22
• 1. 儀器及材料22-25
• 1.1. 儀器22
• 1.2. 試劑22-23
• 1.3. 常用試劑的配制23-25
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法25-30
• 2.1. 噬菌體滴度的測(cè)定方法25-26
• 2.2. 噬菌體的擴(kuò)增26-27
• 2.3. 噬菌體淘選27-30
• 2.4. 分子模擬30
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-35
• 4.1. 利用噬菌體展示鑒定出Ab1和Ab2的抗原表位30-34
• 4.2. Ab1和Ab2可能通過阻礙TRAIL與DR5結(jié)合而發(fā)揮作用34-35
• 第三部分 總結(jié)35-36
• 第四部分 綜述36-51
• 第五部分 參考文獻(xiàn)51-62
• 第六部分 致謝62-63

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：366740