本文關(guān)鍵詞：云南大理州并殖吸蟲的病原學(xué)及分子系統(tǒng)學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]調(diào)查云南省大理州并殖吸蟲的蟲種分布,了解其第二中間宿主溪蟹的自然感染情況,并通過形態(tài)學(xué)觀測和分子生物學(xué)鑒定研究陳氏貍殖吸蟲的獨立性,為并殖吸蟲種株的分類學(xué)、云南省并殖吸蟲病的流行區(qū)劃分布和防治提供科學(xué)依據(jù)。 [方法]從森林覆蓋好的賓川縣山澗溪流中采集并殖吸蟲的第二中間宿主溪蟹,分離囊蚴,通過形態(tài)學(xué)鑒定分類后,經(jīng)口飼感染實驗動物家貓,收集糞便查找蟲卵,解剖實驗動物,收集蟲體和蟲卵,分別制成固定標(biāo)本或染色封片標(biāo)本,進(jìn)行詳細(xì)的形態(tài)學(xué)研究和描述。用試劑盒分別提取并殖吸蟲的囊蚴、后尾蚴和成蟲的DNA,用ITS2和COⅠ基因引物分別體外擴(kuò)增其相應(yīng)的基因片段并測得序列；從GenBank中檢索到并殖吸蟲的ITS2和COⅠ基因序列,用DNAStar軟件的SeqMan程序?qū)λ@得的DNA序列進(jìn)行分析,使用MEGA4.0軟件構(gòu)建基因進(jìn)化樹。 [結(jié)果]1.自賓川縣采集的溪蟹體型小,深褐色,初步鑒定可能為一新種,暫命名為拉烏溪蟹(Potamon lawuense sp.),其分類地位隸屬于溪蟹總科,溪蟹科,溪蟹屬。溪蟹的自然感染率為13.24%,平均每蟹的感染度為3.67個,單只溪蟹的最高感染度為24個。用賓川縣的并殖吸蟲囊蚴感染2只家貓,成蟲回收率分別為27.27%和77.27%。 2.本研究采集的溪蟹體內(nèi)共檢獲66個并殖吸蟲囊蚴,大多為類圓形,均為單層囊壁；活體囊蚴大小平均為(435.28±25.84)μm×(424.25±26.92)μm,囊壁厚度平均為(13.65±1.80)μm；后尾蚴充滿囊腔,與囊壁間無明顯空隙,黑色的排泄囊和兩側(cè)彎曲的腸管清晰可見。 取自實驗貓肺臟內(nèi)的并殖吸蟲活體成蟲肉紅色,蟲體肥碩；輕壓固定后呈磚灰色,窄長形。測量21個標(biāo)本,成蟲大小平均為(10.529±2.081)mm×(3.648±0.827)mm,寬長比例為1：2.92�？凇⒏刮P橫徑之比為0.743：1,腹吸盤大于口吸盤。卵巢中心體多數(shù)明顯,呈指狀分葉,分3-6葉；子宮內(nèi)充滿蟲卵,形似管狀蟠曲成團(tuán),與卵巢并列；睪丸中心體較小,呈長形分葉狀,分葉長短粗細(xì)不一,分3-5葉,分葉末端常有膨大。家貓糞便中的蟲卵多呈橢圓形,金黃色。測量50個蟲卵,其大小平均為(73.01±6.93)μmx(46.80±3.33)μm;最寬處位于蟲卵前1/3,卵殼厚薄不均勻,末端明顯增厚,卵蓋位于較寬一端,絕大部分蟲卵末端可見疣狀突起,占88%。賓川的并殖吸蟲成蟲、囊蚴和蟲卵的形態(tài)特征符合陳氏貍殖吸蟲的形態(tài)特征。 3.采自云南賓川縣的陳氏貍殖吸蟲的DNA序列分析,ITS2和COⅠ基因的PCR擴(kuò)增所獲目的片段長度約500bp；云南賓川株與金平株和保山株的遺傳距離極近,同源性極高,同為陳氏貍殖吸蟲；其與Blair等報道的采自云南勐臘縣的斯氏貍殖吸蟲和Doanh等報道的采自越南的斯氏貍殖吸蟲的ITS2以90%的置信度和COⅠ以97%的置信度共同聚類為一支。 [結(jié)論]1.云南省大理州賓川縣是本研究新發(fā)現(xiàn)的陳氏貍殖吸蟲自然疫源地。2.云南的拉烏溪蟹是陳氏貍殖吸蟲的第二中間宿主。家貓對陳氏貍殖吸蟲易感,是其適宜的實驗終宿主和理想的動物模型。3.本研究在形態(tài)學(xué)觀測的基礎(chǔ)上結(jié)合分子生物學(xué)方法,從宏觀和微觀兩個方面進(jìn)一步確定了陳氏貍殖吸蟲的獨立性和分類地位。4.DNA序列分析顯示云南省不同地區(qū)的陳氏貍殖吸蟲間的遺傳距離極近,同源性極高,在進(jìn)化樹上聚類為一支,獨立于其它蟲種之外。而Blair等報道的采自云南勐臘縣的斯氏貍殖吸蟲、Doanh等報道的采自越南的斯氏貍殖吸蟲,就其基因序列而言應(yīng)與大理州賓川縣的陳氏貍殖吸蟲為同一蟲種,均為陳氏貍殖吸蟲。5.本研究進(jìn)一步證明不同蟲期標(biāo)本提取的DNA,對研究并殖吸蟲的ITS2和COⅠ基因序列沒有影響。
【關(guān)鍵詞】：并殖吸蟲 肺吸蟲 陳氏貍殖吸蟲 形態(tài)學(xué) DNA序列 云南省
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R383.23
【目錄】：

• 英文縮略詞5-7
• 引物名稱及序列7-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-25
• 結(jié)果25-38
• 1 大理州并殖吸蟲的宿主感染情況25-26
• 2 賓川陳氏貍殖吸蟲的形態(tài)特征26-33
• 3 賓川陳氏貍殖吸蟲的DNA序列分析33-38
• 討論38-50
• 1 云南省賓川縣是新發(fā)現(xiàn)的陳氏貍殖吸蟲的自然疫源地38
• 2 陳氏貍殖吸蟲的病原學(xué)研究38-43
• 3 賓川陳氏貍殖吸蟲的分子生物學(xué)研究43-50
• 結(jié)論50-51
• 本研究的創(chuàng)新性51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 綜述56-66
• 參考文獻(xiàn)63-66
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文66-67
• 致謝67-68
• 附錄68-71
• Ⅰ 賓川陳氏貍殖吸蟲ITS2基因序列Blast同源性比較68-69
• Ⅱ 賓川陳氏貍殖吸蟲COⅠ基因序列Blast同源性比較69-70
• Ⅲ 不同并殖吸蟲的ITS2基因序列兩兩對比P距離(Kimura-2-parameter)70-71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：365847