本文關(guān)鍵詞：外源性硫化氫干預(yù)人臍靜脈平滑肌細胞鈣化機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本實驗在運用組織塊重復(fù)貼壁培養(yǎng)原代平滑肌細胞的基礎(chǔ)上，復(fù)制人臍靜脈平滑肌細胞（human umbilical vein smooth muscle cells, HUSMCs）鈣化模型，探尋外源性硫化氫（hydrogen sulfide, H_2S）供體硫氫化鈉（sodium hydrosulfide, NaHS）對HUSMCs鈣化干預(yù)機制研究。方法 1.原代人臍靜脈組織塊重復(fù)貼壁培養(yǎng)法 以改良人臍靜脈平滑肌細胞貼壁培養(yǎng)法為基礎(chǔ)，將已培養(yǎng)組織塊再次接種于新培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，用倒置顯微鏡觀察細胞的生長，采用免疫細胞化學(xué)方法鑒定為平滑肌細胞。 2.H_2S對HUSMCs鈣化干預(yù)及其機制研究 2.1在成功復(fù)制HUSMCs鈣化模型基礎(chǔ)上，給予NaHS進行培養(yǎng)，，實驗分為6組（n=6）：對照組（10%FBS正常培養(yǎng)液）、鈣化組（12mmol/L β-GP）、單純NaHS組（8.0×10~(-6)M NaHS）、鈣化+NaHS高劑量組（4.0×10~(-5)M NaHS）、鈣化+NaHS中劑量組（8.0×10~(-6)M NaHS）、鈣化+NaHS低劑量組（1.6×10~(-6)M NaHS）。 2.2檢測方法 ①對細胞Von Kossa染色、顯微圖像分析、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性和細胞鈣含量等指標(biāo)進行檢測，觀察各組細胞鈣沉積情況。 ②酶聯(lián)免疫吸附法檢測細胞培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growthfactorβ1, TGFβ1)的活性。 ③Real-Time PCR法檢測細胞中TGFβ1mRNA及核心結(jié)合因子α1（core bindingfactor α1, Cbfα1）mRNA表達。 ④Western blot法檢測HUSMCs中骨橋蛋白（osteopontin, OPN）表達。結(jié)果 H_2S對HUSMCs鈣化的影響及其機制研究 ①H_2S可明顯減少HUSMCs鈣結(jié)節(jié)的聚集生長，Von Kossa染色顯示細胞聚集處棕褐色鈣結(jié)節(jié)較鈣化組明顯減輕（P＜0.05）；NaHS-低、中、高劑量組鈣化細胞百分比、細胞鈣含量和堿性磷酸酶活性較鈣化組明顯降低（P＜0.05）。 ②NaHS-低、中、高劑量組與鈣化組相比，培養(yǎng)液中TGFβ1的活性、細胞內(nèi)TGFβ1mRNA、Cbfα1mRNA表達及OPN表達均較鈣化組減少（P＜0.05)。結(jié)論 H_2S可能通過影響TGFβ1-Smads-Cbfα1信號通路級聯(lián)效應(yīng)，減弱信號通路中關(guān)鍵信號分子TGFβ1、Cbfα1表達，減少OPN的表達，發(fā)揮抑制HUSMCs鈣化的作用。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 血管鈣化 轉(zhuǎn)化生長因子β1 核心結(jié)合因子α1 骨橋蛋白
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 材料方法13-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 附圖47-51
• 參考文獻51-56
• 綜述56-72
• 綜述參考文獻65-72
• 致謝72-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文73-74
• 個人簡歷74

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 余傳林，張佩文，羅盛康，劉秋菊，李銳松;3，4’，5－三羥基芪－3－β－單－D－葡萄糖甙對血管內(nèi)皮細胞的保護作用和機理的研究[J];中藥藥理與臨床;1994年02期

2 郝鋒,劉乃豐;糖基化終產(chǎn)物促進培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞表達單核細胞趨化蛋白-1[J];中國病理生理雜志;2000年10期

3 李紅華,劉厚奇,湯淑萍,熊俊,湯瑞寶,胡凱猛;hVEGF_(121)基因轉(zhuǎn)染對人臍靜脈內(nèi)皮細胞生長的作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2004年10期

4 王志華;何志旭;汪浩文;米薔;;人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞飼養(yǎng)層的制備[J];臨床兒科雜志;2008年10期

5 林建華;血管移植物內(nèi)皮種植的新證據(jù)與新希望[J];國際外科學(xué)雜志;1993年01期

6 滿國彤,鳳志慧,張同琳,周孝思;人、豬、鼠血管內(nèi)皮及平滑肌細胞培養(yǎng)與純化方法的改進[J];中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志;2001年02期

7 朱玉琨;;臍靜脈插管的臨床應(yīng)用[J];人民軍醫(yī);1976年02期

8 余祥彬,錢定華,劉錫鈞;腫瘤壞死因子對內(nèi)皮細胞的損傷及藥物的保護作用[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1996年10期

9 李德華;單偉;張海峰;趙寶東;秦書儉;;人臍靜脈間充質(zhì)干細胞原代培養(yǎng)換液頻度與細胞增殖生長的關(guān)系[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年20期

10 李德華;單偉;曹云星;秦書儉;;體外分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮及內(nèi)皮下間充質(zhì)干細胞[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2007年24期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 詹鷹;劉繼紅;封江南;肖恒軍;李忠遠;張朝暉;王濤;陳俊;王少剛;葉章群;;腺病毒介導(dǎo)的RNA干擾對人陰莖海綿體平滑肌細胞PDE5基因表達的抑制作用[A];第十六屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

2 張亮;梁朝朝;張賢生;郝宗耀;周駿;樊松;葛魏巍;李玉;;大鼠慢性非細菌性前列腺炎模型的建立與前列腺平滑肌細胞的分離純化[A];第十六屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

3 司軍強;蔣志根;A.L.Nuttall;;一氧化氮對耳蝸螺旋動脈平滑肌細胞的作用[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

4 費乃昕;馬濤;薛承銳;;大黃素對大鼠結(jié)腸環(huán)行平滑肌細胞[Ca~(2+)]i的影響[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合血瘀證及活血化瘀研究學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2005年

5 馬濤;齊清會;楊文修;;大黃素誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸環(huán)形平滑肌細胞的收縮效應(yīng)和細胞內(nèi)Ca~(2+)信號[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2004年年會論文集[C];2005年

6 劉偉;章杰;李文芳;付建華;劉麗忠;楊紅華;文輝才;;兔陰道平滑肌細胞體外分離與培養(yǎng)[A];第四屆華東六省一市整形外科學(xué)術(shù)會議暨2007年浙江省整形、美容學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

7 萬少平;鄭航;胡禮泉;鄭新民;;大鼠膀胱頸平滑肌細胞體外培養(yǎng)與鑒定[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

8 葛魏巍;梁朝朝;葉元平;郝宗耀;周駿;;大鼠前列腺平滑肌細胞電壓依賴性鈣通道的表達[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

9 徐成勝;吳勇波;曾和松;;瘦素、胰島素及白細胞介素-6對鼠平滑肌細胞瘦素受體mRNA表達的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

10 趙剛;宋明寶;于學(xué)軍;朱光旭;于世勇;董紅梅;康華利;黃嵐;;鈣離子跨縫隙連接在內(nèi)皮細胞與平滑肌細胞間傳遞的研究[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張磊;斑塊內(nèi)平滑肌細胞可能源于骨髓[N];中國醫(yī)藥報;2004年

2 ;血管緊張素Ⅱ和氯沙坦對大鼠小動脈平滑肌細胞的基質(zhì)金屬蛋白酶2和9表達的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

3 衣曉峰邋通訊員 陳英云;缺氧性肺動脈高壓發(fā)病機理被揭示[N];健康報;2007年

4 王艷紅;美科學(xué)家用骨髓成體干細胞培育出血管[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

5 本報記者 衣曉峰邋靳萬慶;肺動脈高壓發(fā)病機理有新見解[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

6 李學(xué)華;美成功利用頭發(fā)毛囊干細胞制備血管和皮膚[N];科技日報;2008年

7 衣曉峰邋陳英云;我國學(xué)者發(fā)現(xiàn)15—HETE對缺氧肺動脈具有收縮作用[N];中國醫(yī)藥報;2007年

8 李春梅;我國心血管疾病救治研究獲進展[N];中國醫(yī)藥報;2005年

9 劉道安;細胞產(chǎn)品國家工程研究中心啟用間充質(zhì)干細胞庫[N];健康報;2007年

10 張中橋;人巨細胞病毒感染可致動脈粥樣硬化[N];中國醫(yī)藥報;2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁自文;人臍靜脈內(nèi)皮細胞內(nèi)毒素刺激后差異表達基因的克隆特性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 王海燕;1Gs恒磁場對共培養(yǎng)內(nèi)皮細胞增殖活性和膜離子通道的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 李紅華;人胚胎間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化體外模型的建立及分化機制初探[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 唐小春;硝基化脂肪酸抑制血管緊張素誘導(dǎo)的血壓升高和誘導(dǎo)平滑肌細胞凋亡[D];吉林大學(xué);2010年

5 黃元;HnrnpA1在胚胎干細胞向平滑肌細胞分化中的作用[D];浙江大學(xué);2013年

6 張磊;血管緊張素Ⅱ?qū)ρ貥友趸兔芏戎鞍资荏w表達的影響以及纈沙坦的拮抗作用研究[D];浙江大學(xué);2002年

7 張英民;內(nèi)皮素-1對人血管平滑肌細胞增殖調(diào)節(jié)的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

8 劉海偉;CREG表達調(diào)控人血管平滑肌細胞HITASY表型轉(zhuǎn)換機制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 周宏博;熊果苷、硒和血紅素體外抗氧化作用的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2003年

10 婁金麗;復(fù)方威麥寧抗肺癌轉(zhuǎn)移作用及其分子機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 昝海英;外源性硫化氫干預(yù)人臍靜脈平滑肌細胞鈣化機制研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2013年

2 羅凱云;不同飽和度的單純甘油酯對動脈粥樣硬化模型的平滑肌細胞功能的影響[D];南昌大學(xué);2013年

3 秦曉娟;紅花黃色素對血管平滑肌細胞增殖及bcl-2/bax蛋白表達的影響[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2009年

4 張鵬;平滑肌細胞特異性Smad4基因敲除小鼠的建立[D];蘭州大學(xué);2010年

5 楊琰;干細胞因子對糖尿病小鼠十二指腸運動的影響：Cajal間質(zhì)細胞、平滑肌細胞的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

6 張娟;血管緊張素-（1-7）對人臍靜脈平滑肌細胞鈣化的影響及其可能機制[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2010年

7 楊廣;通冠膠囊改善冠心病患者PCI術(shù)后心肌有效再灌注的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

8 趙巍;SDF-1/CXCR4生物學(xué)軸在動脈粥樣硬化中的作用[D];吉林大學(xué);2007年

9 夏承來;壓應(yīng)力通過調(diào)節(jié)SREBP-1/小凹蛋白-1信號通路促進ox-LDL誘導(dǎo)的平滑肌細胞膽固醇蓄積[D];南華大學(xué);2007年

10 李世煌;ox-LDL對骨髓干細胞分化的平滑肌細胞泡沫化的影響[D];南華大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：外源性硫化氫干預(yù)人臍靜脈平滑肌細胞鈣化機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：365664