本文關(guān)鍵詞：外源性硫化氫干預(yù)人臍靜脈平滑肌細(xì)胞鈣化機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)在運(yùn)用組織塊重復(fù)貼壁培養(yǎng)原代平滑肌細(xì)胞的基礎(chǔ)上，復(fù)制人臍靜脈平滑肌細(xì)胞（human umbilical vein smooth muscle cells, HUSMCs）鈣化模型，探尋外源性硫化氫（hydrogen sulfide, H_2S）供體硫氫化鈉（sodium hydrosulfide, NaHS）對(duì)HUSMCs鈣化干預(yù)機(jī)制研究。方法 1.原代人臍靜脈組織塊重復(fù)貼壁培養(yǎng)法 以改良人臍靜脈平滑肌細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法為基礎(chǔ)，將已培養(yǎng)組織塊再次接種于新培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定為平滑肌細(xì)胞。 2.H_2S對(duì)HUSMCs鈣化干預(yù)及其機(jī)制研究 2.1在成功復(fù)制HUSMCs鈣化模型基礎(chǔ)上，給予NaHS進(jìn)行培養(yǎng)，，實(shí)驗(yàn)分為6組（n=6）：對(duì)照組（10%FBS正常培養(yǎng)液）、鈣化組（12mmol/L β-GP）、單純NaHS組（8.0×10~(-6)M NaHS）、鈣化+NaHS高劑量組（4.0×10~(-5)M NaHS）、鈣化+NaHS中劑量組（8.0×10~(-6)M NaHS）、鈣化+NaHS低劑量組（1.6×10~(-6)M NaHS）。 2.2檢測(cè)方法 ①對(duì)細(xì)胞Von Kossa染色、顯微圖像分析、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性和細(xì)胞鈣含量等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，觀察各組細(xì)胞鈣沉積情況。 ②酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growthfactorβ1, TGFβ1)的活性。 ③Real-Time PCR法檢測(cè)細(xì)胞中TGFβ1mRNA及核心結(jié)合因子α1（core bindingfactor α1, Cbfα1）mRNA表達(dá)。 ④Western blot法檢測(cè)HUSMCs中骨橋蛋白（osteopontin, OPN）表達(dá)。結(jié)果 H_2S對(duì)HUSMCs鈣化的影響及其機(jī)制研究 ①H_2S可明顯減少HUSMCs鈣結(jié)節(jié)的聚集生長(zhǎng)，Von Kossa染色顯示細(xì)胞聚集處棕褐色鈣結(jié)節(jié)較鈣化組明顯減輕（P＜0.05）；NaHS-低、中、高劑量組鈣化細(xì)胞百分比、細(xì)胞鈣含量和堿性磷酸酶活性較鈣化組明顯降低（P＜0.05）。 ②NaHS-低、中、高劑量組與鈣化組相比，培養(yǎng)液中TGFβ1的活性、細(xì)胞內(nèi)TGFβ1mRNA、Cbfα1mRNA表達(dá)及OPN表達(dá)均較鈣化組減少（P＜0.05)。結(jié)論 H_2S可能通過(guò)影響TGFβ1-Smads-Cbfα1信號(hào)通路級(jí)聯(lián)效應(yīng)，減弱信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子TGFβ1、Cbfα1表達(dá)，減少OPN的表達(dá)，發(fā)揮抑制HUSMCs鈣化的作用。
【關(guān)鍵詞】：硫化氫 血管鈣化 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1 核心結(jié)合因子α1 骨橋蛋白
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 前言10-13
• 材料方法13-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 附圖47-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 綜述56-72
• 綜述參考文獻(xiàn)65-72
• 致謝72-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文73-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74

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本文編號(hào)：365664