目的獲取樹鼩β-淀粉樣前體蛋白切割酶BACE1 （beta-site APP cleaving enzyme-1）的全長(zhǎng)編碼序列并進(jìn)行分子特征分析,為開展AD疾病的機(jī)制研究提供依據(jù)。方法提取樹鼩大腦及其他臟器組織總RNA,通過RACE （rapid-amplification of cDNA ends）實(shí)驗(yàn)得到的序列與中間序列進(jìn)行拼接得到樹鼩BACE1全長(zhǎng)編碼序列,使用DNAMAN、MEGA 10.0.5、PyMOL等生物信息學(xué)軟件,對(duì)其序列和分子特征進(jìn)行分析。結(jié)果樹鼩BACE1除在腦組織表達(dá)外,在外周組織也有表達(dá)。樹鼩BACE1核酸序列和蛋白質(zhì)分子整體結(jié)構(gòu)與人類高度相似,樹鼩與人類的BACE1蛋白在膜內(nèi)結(jié)構(gòu)區(qū)均存在一個(gè)高度保守的DXXLL的ACDL分選內(nèi)吞基序,兩者具有相同的胞外域、跨膜域及胞內(nèi)域,但樹鼩BACE1蛋白質(zhì)相比人少一個(gè)潛在的乙�；稽c(diǎn),并且在折疊結(jié)構(gòu)上存在差異。結(jié)論本研究獲得樹鼩BACE1基因完整編碼序列,其蛋白基本結(jié)構(gòu)與人的基本相似,提示樹鼩可能是作為研究AD病理改變或藥物研究潛在的理想模型。 

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 樹鼩BACE1的分子克隆
            (一) BACE1引物設(shè)計(jì)
            (二) RNA與cDNA制備
            (三) 普通PCR
            (四) 3’RACE巢式PCR
            (五) 5’RACE巢式PCR
            (六) 測(cè)序
        1.2.2 序列分析
        1.2.3 BACE1的表達(dá)模式分析
            (一) RNA相對(duì)表達(dá)定量
            (二) Western blotting
2 結(jié)果
    2.1 RACE 結(jié)果與序列分析
    2.2 樹鼩BACE1氨基酸序列的分析
    2.3 BACE1蛋白三維結(jié)構(gòu)分析
    2.4 樹鼩BACE1基因在不同年齡段腦組織的表達(dá)分析
    2.5 樹鼩BACE1蛋白的表達(dá)模式分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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