目的獲取樹鼩β-淀粉樣前體蛋白切割酶BACE1 （beta-site APP cleaving enzyme-1）的全長編碼序列并進行分子特征分析,為開展AD疾病的機制研究提供依據(jù)。方法提取樹鼩大腦及其他臟器組織總RNA,通過RACE （rapid-amplification of cDNA ends）實驗得到的序列與中間序列進行拼接得到樹鼩BACE1全長編碼序列,使用DNAMAN、MEGA 10.0.5、PyMOL等生物信息學軟件,對其序列和分子特征進行分析。結果樹鼩BACE1除在腦組織表達外,在外周組織也有表達。樹鼩BACE1核酸序列和蛋白質分子整體結構與人類高度相似,樹鼩與人類的BACE1蛋白在膜內結構區(qū)均存在一個高度保守的DXXLL的ACDL分選內吞基序,兩者具有相同的胞外域、跨膜域及胞內域,但樹鼩BACE1蛋白質相比人少一個潛在的乙酰基化位點,并且在折疊結構上存在差異。結論本研究獲得樹鼩BACE1基因完整編碼序列,其蛋白基本結構與人的基本相似,提示樹鼩可能是作為研究AD病理改變或藥物研究潛在的理想模型。 

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗動物
    1.2 實驗方法
        1.2.1 樹鼩BACE1的分子克隆
            (一) BACE1引物設計
            (二) RNA與cDNA制備
            (三) 普通PCR
            (四) 3’RACE巢式PCR
            (五) 5’RACE巢式PCR
            (六) 測序
        1.2.2 序列分析
        1.2.3 BACE1的表達模式分析
            (一) RNA相對表達定量
            (二) Western blotting
2 結果
    2.1 RACE 結果與序列分析
    2.2 樹鼩BACE1氨基酸序列的分析
    2.3 BACE1蛋白三維結構分析
    2.4 樹鼩BACE1基因在不同年齡段腦組織的表達分析
    2.5 樹鼩BACE1蛋白的表達模式分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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[7]阿爾茨海默病病因學研究進展及治療展望[J]. 陳彪,馬秋蘭.  中華神經科雜志. 2003(02)

博士論文
[1]DKK1抑制巨噬細胞內脂質沉積及其相關分子機制[D]. 張瑜.山東大學 2015



本文編號：3655466