發(fā)布時(shí)間：2017-05-14 05:01

  本文關(guān)鍵詞：高原鼠兔血紅素氧合酶-1的基因克隆及序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的 高原鼠兔是青藏高原特有的小型哺乳動(dòng)物，為兔形目、鼠兔科、鼠兔屬，世代生活在海拔3200~4700M的低氧、極寒高山草甸和草原，在其數(shù)代的自然選擇、進(jìn)化過程中已形成自己獨(dú)特的高效率的能量代謝和氧傳遞利用機(jī)制，使其可以耐受高原環(huán)境的低氧、高寒，高原屬兔對高原環(huán)境發(fā)展變化發(fā)揮著巨大的影響力，使其成為高原獨(dú)特的生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分。 近年來大量研究指出，眾多因素均可誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)上調(diào)，HO-1及降解血紅素產(chǎn)物一氧化碳、膽紅素、膽綠素、和鐵離子參與機(jī)體許多生理和病理過程，發(fā)揮著積極重要的調(diào)節(jié)作用。HO-1在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，通過抑制炎性因子的產(chǎn)生、多方面抗氧化應(yīng)激、直接衰減炎癥應(yīng)答，從而達(dá)到對細(xì)胞的保護(hù)。 本課題以高原鼠兔為研究對象，克隆并分析高原鼠兔HO-1基因cDNA序列，為從基因調(diào)控水平進(jìn)一步探討高原鼠兔低氧適應(yīng)的分子生物學(xué)機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 研究方法 2011年7月于青海省天俊縣木里鎮(zhèn)（海拔約4062M）捕捉高原鼠兔13只，平均體重200g。鼠兔采樣后進(jìn)行相關(guān)生理學(xué)指標(biāo)采集后，25%烏拉坦腹腔注射麻醉，解剖后取肝組織并置于液氮中，低溫保存?zhèn)溆貌⑦\(yùn)回西寧。通過GenBank中公布的兔、人、牛、小鼠、大鼠等哺乳動(dòng)物物種的HO-1的cDNA序列，根據(jù)其同源性，利用Primer5.0軟件DNAMAN6.0軟件結(jié)合鼠兔與以上各物種間HO-1比對得到的相對保守區(qū)來設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物。提取總RNA，利用逆轉(zhuǎn)錄酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)擴(kuò)增目的基因，鑒定后測序。 研究結(jié)果 對測序結(jié)果進(jìn)行拼接，所測序列得到cDNA全長序列，長度1466bp（GenBank登錄號(hào)為：JX035934）。軟件預(yù)測得出高原鼠兔HO-1基因編碼區(qū)的核苷酸長度為873bp，可編碼290個(gè)氨基酸。高原鼠兔HO-1與兔、人、牛、小家鼠、大鼠、豬、馬H0-1核苷酸序列及氨基酸序列的同源性達(dá)到為80%以上。在本研究進(jìn)行的氨基酸差異性位點(diǎn)分析中，所比較物種的15個(gè)氨基酸差異性位點(diǎn)中有5個(gè)位點(diǎn)（第4，92，223，250，255）可能導(dǎo)致各物種在調(diào)節(jié)HO-1與低氧相關(guān)因子子相互作用方面產(chǎn)生差異。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)首次成功地獲得高原鼠兔血紅素氧合酶-1基因編碼區(qū)cDNA序列全長（GenBank登錄號(hào)為JX035934），15個(gè)氨基酸差異性位點(diǎn)中有5個(gè)位點(diǎn)（第4，92，223，，250，255）可能導(dǎo)致各物種在調(diào)節(jié)HO-1與低氧相關(guān)因子子相互作用方面產(chǎn)生差異，進(jìn)而對高原低氧適應(yīng)的調(diào)控造成重要的影響。多個(gè)基因位點(diǎn)的發(fā)生突變，從這一層面分析也反映出，與移居高原的同科物種比較，世居高原的鼠兔仍與其存在著結(jié)構(gòu)、功能上的顯著差異，這或許是高原鼠兔對高原遺傳性適應(yīng)的一種表現(xiàn)，也可能是其抗缺氧能力更強(qiáng)的原因之一，但是突變位點(diǎn)與高原適應(yīng)相關(guān)聯(lián)的具體機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。由于HO-1與細(xì)胞保護(hù)密切相關(guān)，上述發(fā)現(xiàn)為更進(jìn)一步的了解高原鼠兔保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷的機(jī)理，通過進(jìn)一步對高原鼠兔適應(yīng)高原低氧高寒相關(guān)基因的研究，對于今后更好地及早干預(yù)氧化損傷疾病的發(fā)展進(jìn)程，治愈氧化損傷等引起的疾病具有重大的意義。
【關(guān)鍵詞】：高原鼠兔 血紅素氧合酶-1 低氧適應(yīng) cDNA克隆 序列分析
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-7
• 引言7-12
• 一. 材料與方法12-21
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料12-13
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法13-21
• 二．結(jié)果21-28
• 2.1 總 RNA 的提取21
• 2.2 PCR 擴(kuò)增結(jié)果21-22
• 2.3 測序結(jié)果及序列分析22-28
• 三. 討論28-32
• 四. 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 中英文縮略詞表37-38
• 致謝38-39
• 文獻(xiàn)綜述39-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果48-50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：高原鼠兔血紅素氧合酶-1的基因克隆及序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：364284