本文關(guān)鍵詞：抗人白細(xì)胞介素13疫苗的構(gòu)建及免疫學(xué)性質(zhì)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：白細(xì)胞介素-13(interleukin-13, IL-13)被認(rèn)為是哮喘病理機(jī)制中最為核心的介質(zhì),是理想的哮喘疾病干預(yù)靶點。因此,迫切需要對其致病機(jī)理,尤其是氣道重塑等慢性應(yīng)答的分子機(jī)制的深入了解,以及新的治療靶點、疾病干預(yù)手段與治療藥物的研究。目前,應(yīng)用IL-13單克隆抗體治療哮喘在國外已處于II期臨床試驗,但單抗需反復(fù)使用,容易產(chǎn)生耐受,且費用昂貴。以疫苗形式誘導(dǎo)持續(xù)的IL-13中和抗體,對哮喘這樣的慢性疾病而言具有更易于提供持續(xù)干預(yù)的優(yōu)勢,較之單抗更具應(yīng)用潛能。 本研究利用生物信息學(xué)的方法分析、預(yù)測潛在的人IL-13抗原表位,通過基因工程手段將編碼抗原肽的寡核苷酸片段克隆于乙肝核心抗原(HBcAg)基因編碼優(yōu)勢抗原表位的區(qū)段,重組質(zhì)粒經(jīng)鑒定并轉(zhuǎn)化大腸桿菌后誘導(dǎo)表達(dá)了攜帶IL-13抗原肽的重組HBcAg蛋白。經(jīng)硫酸銨沉淀、洗滌,凝膠過濾及密度梯度離心純化重組蛋白,以電鏡觀察確證是否形成病毒樣顆粒。純化的VLPs免疫小鼠獲取了抗血清,建立基于人紅系白血病細(xì)胞TF-1與人肺癌細(xì)胞A549的人IL-13活性檢測試驗,以及中和抑制試驗,體外檢測疫苗免疫的抗血清對IL-13活性的中和能力。從不同免疫劑量、不同佐劑、不同免疫途徑等角度,考察小鼠免疫后,不同粘膜組織和血液中IL-13特異的IgG、IgA應(yīng)答特點,以及IgG、IgG2a亞型應(yīng)答。此外,通過基因重組,以融合和非融合方式表達(dá)成熟的人IL-13蛋白。 研究成功構(gòu)建了基于人IL-13抗原肽的VLPs,并考察了病毒樣顆粒的免疫學(xué)特性,為進(jìn)一步在猴體哮喘模型中開展疾病干預(yù)潛能研究、以及開發(fā)治療臨床慢性哮喘的人IL-13疫苗提供了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：白細(xì)胞介素-13 病毒樣顆粒 疫苗
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-7
• 目錄7-9
• 插圖和附表清單9-11
• 縮略詞表11-13
• 第一章 序言13-21
• 1.1 哮喘是嚴(yán)重的人類疾病13
• 1.2 IL-13在哮喘中的核心病理角色13-14
• 1.3 IL-13作為哮喘治療靶點的依據(jù)14-15
• 1.4 IL-13與其它潛在哮喘治療靶點的比較15
• 1.5 抗IL-13單克隆抗體臨床試驗進(jìn)展15-16
• 1.6 主動免疫較之被動免疫的優(yōu)點16-17
• 1.7 IL-13疫苗研究進(jìn)展17
• 1.8 疫苗病毒樣顆粒形式是實現(xiàn)主動免疫干預(yù)的重要基礎(chǔ)17-19
• 1.9 IL-13疫苗臨床安全性分析19-20
• 1.10 本論文研究目的與意義20-21
• 第二章 人IL-13病毒樣顆粒疫苗構(gòu)建及免疫性質(zhì)研究21-43
• 2.1 主要材料21-22
• 2.1.1 菌株21
• 2.1.2 質(zhì)粒21
• 2.1.3 實驗動物21-22
• 2.2 主要試劑22
• 2.3 主要儀器22
• 2.4 主要溶液及培養(yǎng)基22
• 2.5 實驗方法22-43
• 2.5.1 hIL-13抗原肽病毒樣顆粒疫苗的構(gòu)建22-29
• 2.5.2 hIL-13抗原肽疫苗的誘導(dǎo)表達(dá)29-31
• 2.5.3 基于hIL-13全分子的疫苗構(gòu)建31-37
• 2.5.4 重組hIL-13全分子蛋白的表達(dá)37-38
• 2.5.5 IL-13抗原肽疫苗的小鼠免疫及免疫性質(zhì)檢測38-43
• 第三章 ：結(jié)果與討論43-67
• 3.1 基于hIL-13抗原表位的病毒樣顆粒疫苗構(gòu)建43-50
• 3.1.1 人IL-13抗原表位預(yù)測結(jié)果43-44
• 3.1.2 成功構(gòu)建hIL-13抗原肽疫苗重組質(zhì)粒44-45
• 3.1.3 HBcAg-hIL-13抗原肽嵌合蛋白的表達(dá)45-46
• 3.1.4 HBcAg-hIL-13抗原肽嵌合蛋白的純化與病毒樣顆粒分析46-49
• 3.1.5 討論49-50
• 3.2 基于hIL-13全分子蛋白的疫苗構(gòu)建50-57
• 3.2.1 重組基因片段及載體的制備50-51
• 3.2.2 重組菌落的PCR鑒定51
• 3.2.3 重組質(zhì)粒酶切鑒定51-52
• 3.2.4 重組hIL-13全分子蛋白的表達(dá)52-53
• 3.2.5 重組hIL-13全分子蛋白的純化53-56
• 3.2.6 討論56-57
• 3.3 病毒樣顆粒疫苗在小鼠中的免疫學(xué)特性研究57-67
• 3.3.1 病毒樣顆粒經(jīng)皮下注射免疫的特點57-60
• 3.3.2 病毒樣顆粒經(jīng)鼻腔粘膜免疫的特點60-64
• 3.3.3 免疫獲得的抗血清對IL-13活性的體外中和能力64-65
• 3.3.4 討論65-67
• 第四章 總結(jié)與展望67-73
• 成功獲得了具有體內(nèi)干預(yù)潛能的、基于IL-13抗原表位的病毒樣顆粒疫苗67
• 系統(tǒng)地了解了 IL-13抗原肽-病毒樣顆粒疫苗的免疫學(xué)特性67-68
• 獲得了基因重組的人IL-13成熟蛋白68
• 工作中的不足68-69
• 工作展望69-73
• 致謝73-75
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄81-82
• 附錄B 主要試劑及其設(shè)備82-90
• 附錄C 測序結(jié)果90-95

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：363468