本文關(guān)鍵詞：miR-106b靶向調(diào)控胰島素產(chǎn)生細胞誘導(dǎo)過程中Ngn3基因的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討小鼠骨髓間質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs）向胰島素產(chǎn)生細胞（insulin-secreting cells， ISCs）的誘導(dǎo)分化并鑒定誘導(dǎo)過程中miR-106b靶向調(diào)控神經(jīng)元素3（neurogenin3，Ngn3）基因的表達。 方法 首先，分離培養(yǎng)BMMSCs，，應(yīng)用活化素A（activin A）和β細胞素（betacellulin）將其誘導(dǎo)為ISCs，采用雙硫腙（DTZ）染色和免疫熒光檢測胰島素的表達。然后，運用生物信息學(xué)方法對miR-106b和Ngn3基因的配對關(guān)系進行預(yù)測并通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證。Real-time PCR檢測誘導(dǎo)過程中miR-106b和Ngn3基因的表達。 結(jié)果 BMMSCs經(jīng)傳代純化后，形態(tài)均一，分布均勻，比較規(guī)則，呈長梭形。誘導(dǎo)后的ISCs變?yōu)闄E圓形或者圓形，排列緊密，成團懸起，誘導(dǎo)效率大約為30%；DTZ染色顯示亮紅色或猩紅色，表明細胞中有鋅離子參與胰島素合成；免疫熒光化學(xué)發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)2w后的ISCs有胰島素的表達，呈綠色熒光。靶基因預(yù)測軟件miRanda和TargetScan分別顯示miR-106b和Ngn3基因配對關(guān)系良好。雙熒光素酶報告系統(tǒng)鑒定發(fā)現(xiàn)miR-106b可以作用于Ngn33’UTR進而有效抑制其表達。Real-time PCR結(jié)果顯示隨著誘導(dǎo)時間的延長，Ngn3的表達量逐漸升高而miR-106b的表達量逐漸降低，二者呈負相關(guān)（r=-0.458，P＜0.01）。 結(jié)論miR-106b能夠負性調(diào)控ISCs誘導(dǎo)過程中Ngn3基因的表達。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA 神經(jīng)元素3 胰島素產(chǎn)生細胞 小鼠
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語表8-9
• 前言9-11
• 實驗材料與方法11-16
• 實驗結(jié)果16-23
• 討論23-26
• 結(jié)論26-27
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價27-28
• 參考文獻28-31
• 綜述31-39
• 參考文獻36-39
• 在學(xué)期間科研成績39-40
• 致謝40-41
• 個人簡介41-42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Eunmi Choi;Ki-Chul Hwang;;MicroRNAs as novel regulators of stem cell fate[J];World Journal of Stem Cells;2013年04期

  本文關(guān)鍵詞：miR-106b靶向調(diào)控胰島素產(chǎn)生細胞誘導(dǎo)過程中Ngn3基因的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：363024