本文關鍵詞：帕金森病模型大鼠腦內(nèi)TH表達變化的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：帕金森病(Pakinson disease, PD)是一種多發(fā)于中老年人的緩慢進展的神經(jīng)退行性疾病,目前了解的主要病理變化是黑質(zhì)多巴胺(dopamine, DA)神經(jīng)元的變性,進而導致黑質(zhì)致密部內(nèi)DA及其代謝產(chǎn)物3,4-二羥基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenylacetieaeid, DOPAC)含量明顯減少。但其發(fā)病的確切分子機理尚不清楚,使得對帕金森病的診斷和治療有一定的盲目性,造成療效的不確定和愈后不良。動物模型仍是研究帕金森病及其發(fā)病機制的重要工具,但目前構建動物模型的成功率不高、穩(wěn)定性較差,在一定程度上影響了該病的深入研究。酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase, TH)是多巴胺(dopamine, DA)合成的限速酶,是神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的蛋白標志,其缺乏或減少可能是帕金森病發(fā)病的主要原因。本實驗通過選用不同品系、不同體重的大鼠采用腦內(nèi)單點或雙點注射6-羥多巴胺的方法構建大鼠的帕金森病模型,根據(jù)動物的行為學表現(xiàn)及特異性酪氨酸羥化酶的表達變化,比較影響模型成功率的因素,篩選出表現(xiàn)穩(wěn)定、高成功的模型制作技術,為帕金森病相關研究提供合適的動物模型。同時本實驗采用熒光定量PCR的方法測定大鼠腦內(nèi)TH mRNA的水平,研究腦內(nèi)TH與帕金森病的發(fā)病關系,探索帕金森病發(fā)病的分子機制,為臨床上帕金森病的分子診斷、治療及其相關研究提供實驗依據(jù)。 實驗一帕金森病大鼠模型構建技術的優(yōu)化 選用不同體重、不同品系的大鼠(Wistar/SD)作為實驗對象,腦內(nèi)單點或雙點注射6-羥多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的方法制備PD模型大鼠。術后2周起頸部皮下注射阿撲嗎啡(Apomorphine, APO)誘導大鼠轉圈,平均旋轉圈數(shù)7r/min判斷為成功模型。同時通過HE染色和免疫組織化學染色法檢測大鼠腦組織內(nèi)酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)的表達變化。根據(jù)動物的行為學表現(xiàn)及特異性酪氨酸羥化酶表達變化,比較影響模型成功率、穩(wěn)定性的因素,建立表現(xiàn)穩(wěn)定、高成功的模型制作技術。 術后2周對實驗大鼠進行頸部皮下注射APO誘導轉圈,大鼠出現(xiàn)明顯的首尾相連的轉圈行為。經(jīng)統(tǒng)計學分析,單點注射6-OHDA構建的PD大鼠模型其成功率顯著性的高于雙點；選用體重為180g-240g大鼠構建的PD模型其成功率顯著性的高于選用250g以上的大鼠；而選用SD和Wistar大鼠構建的PD模型其成功率無顯著性差異。選用單點構建的PD模型其穩(wěn)定性高于雙點；選用不同體重的大鼠構建的PD模型其穩(wěn)定性存在差異；選用不同品系的大鼠(Wistar/SD)構建的PD模型其穩(wěn)定性不存在差異。HE染色和TH免疫組化結果表明帕金森病與紋狀體內(nèi)神經(jīng)元的減少有關,特別是TH陽性細胞數(shù)量的減少,明顯影響了多巴胺的合成。 因此以體重為180g-240g的大鼠、腦內(nèi)單點注射6-OHDA的方法構建大鼠帕金森病模型成功率高、穩(wěn)定性好。 實驗二帕金森病模型大鼠腦內(nèi)TH表達變化的實驗研究 本實驗采用熒光定量PCR的方法測定大鼠腦內(nèi)TH mRNA的水平,通過正常大鼠腦內(nèi)TH mRNA表達水平的變化研究模型大鼠腦內(nèi)TH mRNA表達水平的變化,分析THmRNA水平與帕金森病的關系,同時結合論文第一部分中免疫組織化學染色檢測大鼠腦組織內(nèi)酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)的表達變化,研究TH與帕金森病的關系,為臨床上帕金森病的分子診斷和治療提供實驗依據(jù)。 正常大鼠左右腦TH基因的表達無顯著性差異,術后3周的成功帕金森病大鼠損毀側腦(右腦)TH mRNA的表達量約是對照側腦(左腦)的57.4%;術后6周的成功帕金森病大鼠損毀側腦TH mRNA的表達量約是對照側腦的31.7%,術后8周的成功帕金森病大鼠損毀側腦TH mRNA的表達量約是對照側腦的39.9%。研究論文第一部分中TH免疫組化結果顯示PD模型大鼠損毀側腦(右腦)內(nèi)TH陽性細胞數(shù)明顯減少,提示帕金森病與酪氨酸羥化酶的減少有關。 本實驗通過熒光定量PCR的方法對模型大鼠腦內(nèi)TH mRNA表達水平的變化進行定量分析并結合論文第一部分中對腦內(nèi)TH的免疫組化分析,可知帕金森病與腦內(nèi)TH量的減少有關。本實驗為臨床上帕金森病的分子診斷和治療提供了新的思路,例如通過轉染TH基因治療帕金森病等。
【關鍵詞】：帕金森病 大鼠模型 優(yōu)化 酪氨酸羥化酶基因 熒光定量PCR
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 符號說明9-10
• 文獻綜述10-23
• 第一部分 帕金森病及其動物模型的研究進展10-13
• 1 帕金森病的發(fā)病機制概述10-11
• 2 帕金森病模型的建立11-12
• 3 帕金森病模型的評價12-13
• 4 帕金森病的治療13
• 第二部分 酪氨酸羥化酶及其在PD研究中的應用13-17
• 1 TH的調(diào)節(jié)14
• 2 TH的檢測方法14-15
• 3 TH在PD研究中的應用15-16
• 4 熒光定量PCR16-17
• 本研究的目的及意義17-19
• 參考文獻19-23
• 研究論文23-53
• 第一章 帕金森病大鼠模型構建技術的優(yōu)化23-39
• 1 實驗材料23-24
• 2 實驗方法24-28
• 3 實驗結果28-35
• 4 討論35-39
• 第二章 帕金森病模型大鼠腦內(nèi)TH表達變化的實驗研究39-53
• 1 實驗材料39-41
• 2 實驗方法41-45
• 3 實驗結果45-50
• 4 討論50-53
• 全文小結53-54
• 參考文獻54-56
• 致謝56-57
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文目錄57-58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關鍵詞：帕金森病模型大鼠腦內(nèi)TH表達變化的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：362917