本文關(guān)鍵詞：林生地霉致消化道感染的動物實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：林生地霉（Geotrichum silvicola）是2002年從巴西果蠅和印度柞蠶幼蟲身上分離出的一種罕見地霉屬真菌，隨后我科也相繼從一例膿癬患兒皮損中和一例中毒性表皮壞死松解癥患者的血液中分離得到該菌，在此之前未有林生地霉感染人類[1,2]的報道。尹瑞瑞等人通過建立林生地霉致動物系統(tǒng)性感染模型，證實了該菌在一定條件下可引起肝、腎、脾、肺、心等深部臟器的病變，并通過計算載菌量對各臟器的感染情況進(jìn)行了比較。 本實驗通過不同給藥途徑予不同免疫狀態(tài)小鼠注射林生地霉菌懸液，實驗結(jié)束后取小鼠胃、腸道做組織逆培養(yǎng)，檢測其是否能引起胃腸道的感染，并通過計算內(nèi)臟組織載菌量，比較不同免疫狀態(tài)、不同給藥途徑下小鼠胃腸道真菌感染的情況，該實驗將進(jìn)一步豐富林生地霉致小鼠系統(tǒng)性感染的研究。 方法： 1林生地霉引起小鼠系統(tǒng)性感染模型的建立將本科真菌室保存的林生地霉菌株經(jīng)常溫下復(fù)蘇轉(zhuǎn)種，制成菌懸液后注入小鼠體內(nèi)，使其恢復(fù)其活性和毒力，再將分離后的活化菌株用無菌生理鹽水制成一定濃度的菌懸液通過皮下、腹腔、靜脈三種途徑給予小鼠進(jìn)行注射。 2小鼠臨床癥狀及死亡情況的觀察分別對觀察組免疫抑制狀態(tài)、非免疫抑制狀態(tài)每種給藥途徑小鼠的飲食、飲水、反應(yīng)、活動、毛發(fā)變化及精神狀況等進(jìn)行觀察，并記錄14天內(nèi)各組小鼠的死亡情況。與正常對照組小鼠進(jìn)行比較，觀察各實驗組小鼠糞便的次數(shù)、形態(tài)等的變化情況。 3消化道臟器形態(tài)學(xué)觀察將死亡小鼠于無菌條件下取其胃、小腸、大腸，生理鹽水沖洗消化道食物殘渣，觀察臟器大體形態(tài)的變化。 4組織真菌逆培養(yǎng)將小鼠胃、小腸、大腸分離后用組織研磨器研碎，挑取少量內(nèi)臟組織三點接種于沙氏試管培養(yǎng)基的表面，后置于37℃溫箱中培養(yǎng)1周，觀察真菌的生長情況。培養(yǎng)陽性的菌落做酚棉蘭染色，鏡下觀察菌絲及孢子形態(tài)。 5組織病理學(xué)觀察將死亡小鼠進(jìn)行解剖，取肉眼病變較明顯的部分臟器先用10!甲醛液固定，再經(jīng)脫水，透明，浸蠟，包埋，切片，展片后，分別進(jìn)行HE（蘇木素-伊紅）染色和PAS（過碘酸-錫夫）染色。 6胃、腸組織載菌量的測定在無菌條件下將稱重后的胃、小腸、大腸用組織研磨器研碎后，按照1:10（wt/vol）加入無菌生理鹽水混勻，，從中吸取10ul組織懸液均勻的平鋪在沙氏平皿培養(yǎng)基表面，于37℃溫箱中培養(yǎng)48小時后讀取培養(yǎng)基表面的菌落數(shù)，計算各組織中載菌量。 結(jié)果： 1臨床癥狀免疫正常靜脈組和腹腔組各小鼠接種林生地霉后期飲食、飲水稍減少，余無明顯改變。免疫抑制靜脈組和腹腔組小鼠接種林生地霉后早期即出現(xiàn)飲食、飲水減少，毛發(fā)倒逆無光，精神狀態(tài)萎靡，體重持續(xù)下降。免疫正常與免疫抑制皮下組小鼠背部于注射部位出現(xiàn)一綠豆至花生豆大小，質(zhì)稍硬的結(jié)節(jié)，后者較前者結(jié)節(jié)較大，表面有破潰。 2死亡情況免疫抑制靜脈組小鼠在接種后第1天出現(xiàn)死亡，第7天達(dá)到死亡高峰，9天內(nèi)死亡率為100%；免疫抑制腹腔組小鼠在接種菌液后第4天出現(xiàn)死亡，第8天達(dá)到死亡高峰，12天內(nèi)死亡率為100%。其余各組小鼠未出現(xiàn)死亡情況。 3組織大體形態(tài)變化免疫抑制腹腔組和靜脈組小鼠胃、小腸、大腸表面組織發(fā)紅、質(zhì)脆，未見明顯化膿灶，內(nèi)可見極少量內(nèi)容物；免疫抑制皮下組和免疫正常各組小鼠上述臟器肉眼觀無明顯變化。 4組織逆培養(yǎng)免疫抑制與免疫正常腹腔組和靜脈組小鼠胃、小腸、大腸組織逆培養(yǎng)3天左右即可見培養(yǎng)管內(nèi)有菌落生長，且其鏡下菌絲形態(tài)與接種的菌株相同。 5組織病理變化HE染色可見組織細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死，周圍有部分炎細(xì)胞浸潤；PAS染色可以見到組織內(nèi)紫紅色的菌絲和部分關(guān)節(jié)狀或圓形的孢子。 6真菌載菌量的測定免疫抑制靜脈組和腹腔組小鼠胃腸組織載菌量均分別高于免疫正常靜脈組和腹腔組小鼠胃腸組織，其中靜脈組載菌量均高于腹腔組。胃組織載菌量高于腸道組織載菌量，小腸與大腸載菌量無明顯差異。結(jié)論： 1腹腔注射、靜脈注射途徑均可引起小鼠胃、小腸、大腸感染，兩者比較，靜脈注射途徑引起的感染較腹腔注射途徑嚴(yán)重。皮下注射途徑不能引起小鼠胃、小腸、大腸感染。 2免疫抑制狀態(tài)較免疫正常狀態(tài)小鼠更易引起胃、小腸、大腸的感染，也引起更高的死亡率，說明林生地霉致病力與機(jī)體免疫狀態(tài)相關(guān)，是一種條件致病菌。 3無論何種免疫狀態(tài)、何種給藥途徑，胃均較腸道更易引起感染，大腸與小腸的感染情況無明顯差別。 4小鼠胃、腸林生地霉感染病理切片顯示：組織呈炎癥性改變
【關(guān)鍵詞】：林生地霉 免疫狀態(tài) 給藥途徑
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R756;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-21
• 附表21-23
• 討論23-26
• 結(jié)論26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 綜述 真菌生物膜研究進(jìn)展28-42
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 致謝42-43
• 個人簡歷43

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 秦振宇,吳紹熙,譚升順;淺析致病真菌分類的動態(tài)性[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2000年01期

2 項領(lǐng);沈翠芬;;惡性腫瘤患者醫(yī)院深部真菌感染及耐藥情況分析[J];江西醫(yī)藥;2007年02期

3 李新穎;;肺部真菌感染56例分析[J];遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年04期

4 朱海軍;朱敬先;高順強(qiáng);林元珠;袁永貴;;接種途徑對實驗性小鼠林生地霉感染的影響[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2008年07期

5 曹暉;關(guān)于深部真菌感染的相關(guān)研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2005年10期

6 汪長中;程惠娟;徐勝利;張雄飛;官妍;云云;俞麗華;;中藥水提物對白念珠菌生物膜抑制作用的研究[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2009年11期

7 李秀麗,朱敬先,林元珠,高順強(qiáng),白逢彥;我國首見由地霉引起的膿癬一例及實驗研究[J];中華皮膚科雜志;2004年08期

8 高順強(qiáng);朱敬先;林元珠;唐旭華;康瑞花;;中毒性表皮壞死松解癥伴發(fā)林生地霉感染一例[J];中華皮膚科雜志;2006年11期

9 楊健;醫(yī)院真菌感染117例臨床分析[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2000年05期

10 汪長中;程惠娟;官妍;汪斌;洪靜;云云;王艷;;穿心蓮內(nèi)酯體外抗白念珠菌生物膜作用的初步研究[J];中國真菌學(xué)雜志;2008年03期

  本文關(guān)鍵詞：林生地霉致消化道感染的動物實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：362262