本文關(guān)鍵詞：TNF-α對腦缺血再灌注血管新生作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 缺血性腦血管病嚴重危害人類的健康,已經(jīng)成為醫(yī)學界研究的難題,給全世界帶來了困擾。缺血再灌注是使缺血的組織器官重新得到血液灌注,恢復(fù)器官的功能,修復(fù)損傷的組織。促進缺血中心及其周圍組織血管新生,恢復(fù)其血液循環(huán),是目前治療腦缺血新方法。缺血再灌注后炎癥因子對血管新生表現(xiàn)出較大的特殊性,如腫瘤壞死因子-a (TNF-α)可表現(xiàn)出促進或者抑制的雙重角色作用,如何減少其對腦缺血組織損傷,增強神經(jīng)元保護和修復(fù)作用是目前急需解決的研究難題。 研究目的 研究]TNF-α對腦缺血再灌血管新生作用。研究方法 (1)分離純化SD大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(Rat cerebral microvascular endothelail cells RCMECS)、CD31免疫熒光鑒定細胞。(2)純化的RCMECS在正常情況下應(yīng)用MTT法測]TNF-α對其活力影響。(3)缺氧4h／復(fù)氧72h,ELISA檢測外源性和自分泌TNF-α對RCMECS上清VEGF、MMP-2表達影響。(4)第3代RCMEC于缺氧小室內(nèi)培養(yǎng)4h后復(fù)氧,qRT-PCR測定細胞VEGF、MMP-2mRNA表達,并和其他組進行比較。(5)建立MCAO再灌注模型,觀察TNF-α對缺血皮質(zhì)區(qū)血管新生的作用。 結(jié)果 (1)獲得純度為90%RCMECS,符合實驗要求。(2)0.1ng/ml TNF-α加藥后24h降低RCMECS活力(P0.05)。(3)復(fù)氧72h后,自分泌的TNF-α對細胞上清中的VEGF、MMP-2表達沒有影響,而外源性TNF-α給藥組明顯高于模型組(P0.05)。(4)復(fù)氧48h后VEGF、MMP-2mRNA表達量TNF-α組分別是模型組1.7、1.9倍。(5)成功建立MCAO再灌注模型。(6)缺血再灌注后7d、14d、21d TNF-α組皮質(zhì)區(qū)血管新生數(shù)量均高于PBS組。 結(jié)論 TNF-α刺激體外和體內(nèi)模型分泌VEGF、MMP-2增多,促進大鼠MCAO再灌注模型皮質(zhì)區(qū)血管新生。
【關(guān)鍵詞】：大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞 腦缺血再灌注 腫瘤壞死因子-α 血管生成
【學位授予單位】：杭州師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 致謝3-4
• 前言4-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 文中所用的英文縮略詞10-15
• (一) 大鼠腦撖血管內(nèi)皮細胞的分離培養(yǎng)和鑒定15-20
• 1.1 材料與試劑15-17
• 1.1.1 主要儀器15
• 1.1.2 主要試劑15-16
• 1.1.3 主要試劑的配制16-17
• 1.2 方法17-18
• 1.2.1 腦微血管段分離17
• 1.2.2 RCMECS培養(yǎng)17
• 1.2.2.1 鼠尾膠包被17
• 1.2.2.2 RCMECS接種培養(yǎng)17
• 1.2.3 RCMECS傳代培養(yǎng)17
• 1.2.4 細胞形態(tài)觀察17
• 1.2.5 參考文獻進行內(nèi)皮細胞CD31免疫熒光鑒定17-18
• 1.2.6 細胞生長曲線18
• 1.3 結(jié)果18-20
• 1.3.1 RCMECS形態(tài)特征18-19
• 1.3.2 RCMECS CD31免疫熒光鑒定19
• 1.3.3 細胞生長曲線19-20
• 1.4 小結(jié)20
• (二) TNF-a對RCMECS H/R模型VEGF，MMP-2蛋白表達影響20-32
• 2.1 材料和試劑20-21
• 2.1.1 主要儀器20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.1.3 主要試劑配制21
• 2.2 實驗方法21-28
• 2.2.1 TNF-α對RCMECS活性影響21-22
• 2.2.1.1 分組21-22
• 2.2.1.2 方法22
• 2.2.1.3 統(tǒng)計學處理22
• 2.2.2 建立RCMECS H/R模型22
• 2.2.3 自制缺氧小室22-23
• 2.2.4 ELISA檢測TNF-α對H/R RCMECS VEGF表達影響23-25
• 2.2.4.1 分組23
• 2.2.4.2 方法23
• 2.2.4.3 VEGF ELISA標準曲線的制作及各組蛋白含量測定23-25
• 2.2.5 應(yīng)用ELISA法檢測TNF-α對H/R后RCMECS分泌MMP-2蛋白表達25
• 2.2.5.1 分組25
• 2.2.5.2 方法25
• 2.2.5.3 ELISA25
• 2.2.6 測定自分泌TNF-α對H/R RCMECS上清中VEGF、MMP-2表達影響25
• 2.2.6.1 分組25
• 2.2.6.2 方法25
• 2.2.7 細胞自分泌VEGF、MMP-2 ELISA25
• 2.2.8 統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)25
• 2.2.9 qRT-PCR檢測TNF-α對H/R RCMECS VEGF、MMP-2mRNA表達影響25-28
• 2.2.9.1 實驗分組26
• 2.2.9.2 方法26
• 2.2.9.3 qRT-PCR26-28
• 2.2.9.4 統(tǒng)計學分析28
• 2.3 結(jié)果28-31
• 2.3.1 MTT測定TNF-α對RCMECS活性的影響28
• 2.3.2 RCMECS在H/R模型中VEGF蛋白表達受TNF-α影響情況28-29
• 2.3.3 RCMECS在H/R模型中MMP-2蛋白表達受TNF-α影響情況29-30
• 2.3.4 RCMECS自分泌TNF-α對H/R RCMECS上清液中VEGF、MMP-2蛋白水平影響30-31
• 2.3.5 TNF-α對RCMECSH/R模型VEGF、MMP-2 mRNA表達影響31
• 2.4 小結(jié)31-32
• (三) TNF-(x促進大鼠腦中動脈缺血再灌注模型血管生成32-42
• 3.1 實驗材料與方法32-33
• 3.1.1 主要儀器32
• 3.1.2 主要試劑與耗材32-33
• 3.2 實驗動物33
• 3.3 實驗方法33-36
• 3.3.1 溶液配制33
• 3.3.2 實驗分組33
• 3.3.3 大腦皮質(zhì)注射TNF-α33-34
• 3.3.4 大鼠MCAO再灌注模型34
• 3.3.4.1 神經(jīng)功能評分34
• 3.3.5 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色34
• 3.3.6 異硫氰酸標記的葡聚糖微血管密度評價34-35
• 3.3.7 冰凍切片制作及免疫組化35-36
• 3.3.7.1 冰凍切片35
• 3.3.7.2 免疫組織化學測定大鼠缺血灶及周圍組織VEGF、MMP-2蛋白水平35-36
• 3.3.7.2.1 方法和步驟35-36
• 3.3.7.2.2 lmage-pro-plus(IPP)軟件統(tǒng)計分析圖36
• 3.4 統(tǒng)計學分析36
• 3.5 結(jié)果36-42
• 3.5.1 TTC顯色36
• 3.5.2 TNF-α對MCAO再灌注術(shù)后血管新生影響36-38
• 3.5.3 免疫組化表達38-42
• 3.5.3.1 免疫組化分析皮質(zhì)區(qū)梗死灶周圍VEGF,MMP-2蛋白表達,檢測位置38
• 3.5.3.2 免疫組化測VEGF、MMP-2表達38-42
• (四) 討論42-48
• 4.1 RCMECS培養(yǎng)與建立大鼠缺氧復(fù)氧模型42-44
• 4.2 MMT測TNF-α對RCMECS活性影響44
• 4.3 TNF-α對H/R模型RCMECS VEGF mRNA、蛋白的影響44-45
• 4.4 TNF-α對H/R模型RCMECS MMP-2 mRNA、蛋白的影響45-46
• 4.5 實驗動物模型的特點46-47
• 4.6 TNF-α與梗死后血管的增生47-48
• (五) 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-54
• 綜述54-61
• 參考文獻58-61
• 攻讀碩士期間主要科研成果61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 謝崧,錢桂生,楊曉靜;一種用于研究的經(jīng)濟實用缺氧小容器[J];第三軍醫(yī)大學學報;1998年01期

2 田林郁;李勝富;周東;;大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞的分離、培養(yǎng)及不同純化方法的比較[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2010年05期

3 梁慶成,吳云,呂海燕,王維治;腫瘤壞死因子-α預(yù)處理對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響[J];臨床神經(jīng)病學雜志;2003年03期

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6 姜舒,董震,朱冬冬,楊占泉;Local tissue hypoxia and formation of nasal polyps[J];Chinese Medical Journal;2003年02期

  本文關(guān)鍵詞：TNF-α對腦缺血再灌注血管新生作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：362184