本文關(guān)鍵詞：小鼠可溶性IL-5受體α在BactoBac系統(tǒng)中的表達(dá)純化及其對(duì)哮喘小鼠模型治療效果的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：支氣管哮喘（Bronchial Asthma），簡(jiǎn)稱哮喘，是一種以可逆性氣流受限為特征的呼吸道慢性炎癥性疾病。常常伴隨呼吸道高反應(yīng)性、黏液高分泌、支氣管平滑肌收縮、可逆性氣道阻塞等癥狀[1]。目前，全球有哮喘患者約3億人，中國(guó)哮喘患者約3000萬，并且中國(guó)的哮喘發(fā)病率正不斷升高，哮喘已經(jīng)成為嚴(yán)重影響我國(guó)人民身心健康的重要呼吸系統(tǒng)疾病之一[2]。 一般認(rèn)為，哮喘是由于Th2細(xì)胞釋放多種類型細(xì)胞因子在炎癥部位聚集，從而導(dǎo)致局部的炎癥反應(yīng)。這些細(xì)胞因子中，白細(xì)胞介素5（Interleukin-5，IL-5）發(fā)揮了重要的作用[3]。IL-5可以促使嗜酸性粒細(xì)胞（Eosinophils，Eos）的成熟、分化、活化并與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附[4]。目前認(rèn)為，IL-5是通過一個(gè)高親和力受體（IL-5R）復(fù)合物作用于Eos的。IL-5R復(fù)合物包括α和β兩種亞基。α亞基可與IL-5結(jié)合激活其下游通路而發(fā)揮生物學(xué)功能。α亞基有膜結(jié)合型和可溶型兩種不同的轉(zhuǎn)錄體，可溶性α亞基可與膜結(jié)合型α亞基競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合配體從而達(dá)到對(duì)IL-5下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而抑制嗜酸性粒細(xì)胞在過敏性呼吸道炎癥部位聚集，影響哮喘的發(fā)病過程[5]。目前通過抑制IL-5功能來降低嗜酸性粒細(xì)胞聚集，從而抑制哮喘發(fā)病中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)已成為當(dāng)前哮喘疾病的研究熱點(diǎn)。IL-5單克隆抗體能夠在一定程度上抑制哮喘過敏性炎癥反應(yīng)，但由于其異種免疫原性而使其應(yīng)用受到限制[6]。因此，研究一種全面改善哮喘癥狀且適用于多種類型哮喘患者的藥物迫在眉睫。 目的：本研究選Bac-to-Bac桿狀病毒蛋白表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化小鼠可溶性IL-5Rα蛋白，通過研究重組sIL-5Rα在哮喘模型動(dòng)物中治療作用，初步探討sIL-5Rα對(duì)哮喘的治療效果，并為新的哮喘治療藥物的開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。 方法及結(jié)果：應(yīng)用Vector NTIAdvanceII軟件優(yōu)化小鼠IL-5Rα基因胞外區(qū)密碼子并合成序列。并定向克隆于pFastbacI/HTB載體上。pFastbacI/HTB-sIL5Rα轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH10Bac細(xì)胞，篩選陽性單克隆DH10Bac細(xì)菌，提取重組桿粒Bacmid-sIL5Rα，轉(zhuǎn)染sf9昆蟲細(xì)胞株，獲取完整的重組桿狀病毒。鑒定成功后擴(kuò)增病毒并表達(dá)蛋白，并用Western Blot法鑒定重組蛋白為sIL5Rα蛋白。應(yīng)用Ni2+親和層析法純化蛋白，純化后測(cè)定重組蛋白濃度為0.22mg/mL。應(yīng)用重組蛋白干預(yù)哮喘模型小鼠并檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞細(xì)胞百分比，BALF中IL-5、IL-4、Extoxin含量以及和肺組織病理學(xué)變化。結(jié)果顯示用重組sIL5Rα蛋白治療后，治療組嗜酸性粒細(xì)胞百分比顯著降低，BALF中IL-5、Extoxin水平降低，肺組織病理學(xué)變化減輕。 結(jié)論：本研究利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)并純化了小鼠可溶性IL-5Rα蛋白，并用重組可溶性IL-5Rα蛋白治療小鼠哮喘模型，經(jīng)檢測(cè)，，小鼠模型支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞百分比、IL-5、Extoxin較模型組有所降低，病理檢測(cè)結(jié)果有所好轉(zhuǎn)。這說明sIL-5Rα蛋白在哮喘模型動(dòng)物中發(fā)揮了一定的治療作用。
【關(guān)鍵詞】：sIL-5Rα Bac to Bac表達(dá)系統(tǒng) Western Blot 哮喘模型
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R562.25;R-332
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-27
• 一、哮喘概述14-16
• 二、哮喘與 IL-516-21
• 三、IL-5、IL-5 受體與哮喘21-24
• 四、桿狀病毒昆蟲表達(dá)載體系統(tǒng)24-27
• 第一部分 小鼠可溶性 IL-5Rα蛋白在 pFastbacI 載體中的表達(dá)與純化27-55
• 1 材料27-30
• 2 方法30-44
• 3 結(jié)果44-52
• 4 討論52-55
• 第二部分 小鼠可溶性 IL-5Rα蛋白在 pFastbacHTB 載體中的表達(dá)與純化55-67
• 1 材料55-56
• 2 方法56-60
• 3 結(jié)果60-65
• 4 討論65-67
• 第三部分 可溶性 IL-5Rα蛋白對(duì)小鼠哮喘模型的治療效果研究67-76
• 1 材料67-68
• 2 方法68-71
• 3 結(jié)果71-74
• 4 討論74-76
• 小結(jié)76-77
• 參考文獻(xiàn)77-84
• 附錄84-86
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果86-87
• 致謝87

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王曼芝;何慶南;袁紅霞;劉曉亮;;IL-4IL-5及IgE在兒童咳嗽變異性哮喘中的價(jià)值[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2006年05期

2 施俊;呂靜榮;吳皓;;未合并變應(yīng)性鼻炎及哮喘的OSAHS兒童血清Th1/Th2細(xì)胞因子檢測(cè)及臨床意義[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2012年23期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠可溶性IL-5受體α在BactoBac系統(tǒng)中的表達(dá)純化及其對(duì)哮喘小鼠模型治療效果的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：359905