本文關(guān)鍵詞：人外周血樹突狀細(xì)胞的體外優(yōu)化培養(yǎng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1.背景 人類對于惡性腫瘤的治療在歷經(jīng)外科手術(shù)、放療、化療這三種基礎(chǔ)方法后，免疫治療作為第四種新興的治療手段逐漸應(yīng)用于臨床，給一些失去手術(shù)機(jī)會(huì)的晚期腫瘤患者帶來了希望，應(yīng)用免疫激活劑提高機(jī)體免疫功能還可以改善一些實(shí)體瘤如甲狀腺癌、膀胱癌的預(yù)后。 腫瘤的免疫療法之所以在過去幾年有如此快的迅速發(fā)展，得益于科研工作者對腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性及其免疫學(xué)特性深入的研究。通過對腫瘤免疫應(yīng)答機(jī)制的研究，初步認(rèn)為導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限生長的主要原因是腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸與免疫耐受，這些機(jī)制的闡明為腫瘤的臨床治療提供了新的思路，針對腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的不同環(huán)節(jié)采用不同的應(yīng)對措施，使得免疫治療從實(shí)驗(yàn)室研究逐步應(yīng)用于臨床治療。 1992年，Caux【1】等首先發(fā)現(xiàn)將粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）與腫瘤壞死因子α（TNF-α）聯(lián)合加入小鼠造血干細(xì)胞中可成功培養(yǎng)出DC，1995年Bernhard【2】等利用GM-CSF刺激人骨髓和外周血造血干細(xì)胞（CD34+）獲得大量DC，從而極大的推動(dòng)了DC的臨床研究。G-CSF作為一種骨髓動(dòng)員劑，主要作用于粒系祖細(xì)胞，，促進(jìn)其增值、分化，主要應(yīng)用于放化療等粒細(xì)胞減少的血液疾病。但Arpinati等【3】還發(fā)現(xiàn)G-CSF還可以動(dòng)員外周血中抗原提呈細(xì)胞，并刺激幼稚T細(xì)胞分化為輔助T細(xì)胞（Th2），激活機(jī)體的體液免疫反應(yīng)，然后誘導(dǎo)分化出DC。 2．目的及意義： 目前，自體免疫細(xì)胞治療作為一種新興的治療方法，已經(jīng)被列入臨床第三類醫(yī)療技術(shù)的范疇，我課題組已獲得此第三類臨床醫(yī)療技術(shù)的應(yīng)用許可，并開展了前期免疫細(xì)胞的臨床治療工作。 本實(shí)驗(yàn)通過比較兩種細(xì)胞因子G-CSF與GM-CSF對DC細(xì)胞增殖的影響，并初步探討細(xì)胞因子對DC分化及成熟的作用，并且通過添加不同濃度的自體血清，分析體外誘導(dǎo)生成DC的數(shù)量、表面標(biāo)志以及刺激淋巴細(xì)胞增殖的功能，探索外周血DC體外培養(yǎng)的最佳條件，以期合理優(yōu)化DC的體外培養(yǎng)方案。為今后的臨床治療提供數(shù)量、質(zhì)量均合格的DC細(xì)胞以及制定科學(xué)的細(xì)胞免疫治療個(gè)性化方案奠定基礎(chǔ)。 3.方法：分別使用G-CSF與GM-CSF體外誘導(dǎo)外周血單核細(xì)胞分化DC；添加不同濃度的自體血清培養(yǎng)DC。 4.結(jié)果：（1）G-CSF與IL-4聯(lián)用、GM-CSF和IL-4聯(lián)用，都可以在體外誘導(dǎo)人外周血分化出DC；（2）GM-CSF和IL-4聯(lián)用誘導(dǎo)出的DC在數(shù)量及純度上均優(yōu)于G-CSF與IL-4組合；（3）經(jīng)MLR混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)測得兩種組合誘導(dǎo)分化出的DC在刺激T細(xì)胞增殖的作用差距不大；（4）體外培養(yǎng)DC時(shí)，適當(dāng)添加10%的自體血清，可以提高DC的產(chǎn)率。
【關(guān)鍵詞】：樹突狀細(xì)胞 體外培養(yǎng) 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 主要縮略詞表4-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 第一章 研究背景11-15
• 1.1 樹突狀細(xì)胞在免疫應(yīng)答中的作用11-13
• 1.2 樹突狀細(xì)胞激活細(xì)胞毒性 T 淋巴細(xì)胞特異性殺傷腫瘤細(xì)胞13-14
• 1.3 樹突狀細(xì)胞在抗感染免疫中的作用14-15
• 第二章 G-CSF與GM-CSF對人外周血樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)擴(kuò)增優(yōu)化方案的研究15-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 2.1.1 主要試劑15-16
• 2.1.2 主要器具16
• 2.1.3 標(biāo)本來源及實(shí)驗(yàn)分組16
• 2.2 方法16-19
• 2.2.1 梯度離心法分離 PB MC16-17
• 2.2.2 G-CSF與GM-CSF對PBMC的誘導(dǎo)分化17-18
• 2.2.3 DC 形態(tài)學(xué)觀察18
• 2.2.4 DC 表面表型檢測18
• 2.2.5 MLR檢測18-19
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19
• 2.3 結(jié)果19-25
• 2.3.1 DC 的形態(tài)學(xué)采用相差顯微鏡觀察19-21
• 2.3.2 細(xì)胞表型分析21-23
• 2.3.3 DC 功能檢測23-25
• 2.4 討論25-26
• 2.4.1 不同細(xì)胞因子對 DC 體外培養(yǎng)的作用25
• 2.4.2 兩種細(xì)胞因子的安全性研究25-26
• 2.5 結(jié)論26
• 第三章 添加自體血清對樹突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)的影響26-32
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料27
• 3.1.1 主要試劑見 2.1.127
• 3.1.2 主要器具見 2.1.227
• 3.1.3 標(biāo)本來源見 2.1.327
• 3.2 方法27-28
• 3.2.1 梯度離心法分離 PBMC見 2.227
• 3.2.2 培養(yǎng)基中添加不同濃度的自體血清27-28
• 3.2.3 DC 細(xì)胞表型流式細(xì)胞儀檢測見2.2.428
• 3.2.4 統(tǒng)計(jì)分析28
• 3.3 結(jié)果28-30
• 附錄 添加 10 % 自體血清3例DC表面標(biāo)志表型30-31
• 3.4 討論31
• 3.5 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述36-49
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況49-50
• 致謝50-51
• 2011級碩士畢業(yè)生個(gè)人簡介51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李素萍;劉忠;楊宏友;呂蓉;方勤;李敏;趙剛;王震;;體外純化培養(yǎng)外周血來源的樹突狀細(xì)胞的研究[J];中國輸血雜志;2008年10期

2 陳海濱，張錦X，許嘉弟;人外周血樹突狀細(xì)胞的形態(tài)學(xué)研究[J];中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;1996年01期

3 吳楠;劉薇;盧光t;;動(dòng)物血清和無血清培養(yǎng)人外周血樹突狀細(xì)胞效率比較的研究[J];北方藥學(xué);2012年10期

4 張莉;王雪峰;;人外周血樹突狀細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其影響因素的研究[J];遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年02期

5 顏汝平;周海濱;李

本文編號：359881