本文關(guān)鍵詞：FGF10通過K-RAS調(diào)控小鼠肺發(fā)育的分子機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肺是上皮細(xì)胞和周圍間充質(zhì)相互作用形成的典范器官,它以支氣管反復(fù)分支形成的支氣管樹為結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),最終形成肺泡。研究表明,肺發(fā)育過程中結(jié)構(gòu)和功能的異常,可能是人體容易產(chǎn)生肺部疾病的重要原因。數(shù)量眾多的生長因子在肺的形態(tài)發(fā)生過程中起著復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)控作用,FGFs(成纖維細(xì)胞生長因子)就是其中之一。早在上個(gè)世紀(jì)30年代就發(fā)現(xiàn)了這種能促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長的活性物質(zhì),它的家族成員眾多,其中FGF10(角朊細(xì)胞生長因子)是發(fā)育過程中多種器官的重要信號調(diào)節(jié)因子,比如四肢、肺、牙齒、胰腺、眼瞼、腦垂體、皮膚等。研究表明,FGF10在發(fā)育中的肺間充質(zhì)中表達(dá),為肺發(fā)育所必須,其下游主要有四條信號通路,但具體作用機(jī)制還知之甚少。K-RAS是最早被發(fā)現(xiàn)的癌基因之一,也是FGFs下游信號的重要分子開關(guān),研究表明,許多人類惡性腫瘤的發(fā)生都與RAS基因的突變有關(guān)。但FGF10是否是通過RAS-MAPK這一條信號通路對肺發(fā)育起調(diào)控作用仍不得而知。 本研究通過SP-C-rtTA、(Teto)7-Cre和pMes-FGF10三種轉(zhuǎn)基因小鼠的相互交配構(gòu)建出FGF10基因條件性在肺Ⅱ型上皮細(xì)胞中過表達(dá)的三轉(zhuǎn)基因小鼠,利用原位雜交和Real-time PCR技術(shù)對野生型小鼠FGF10基因的時(shí)空表達(dá)模式進(jìn)行了檢測,通過免疫組織化學(xué)等方法對P28的三轉(zhuǎn)基因小鼠的肺部組織進(jìn)行了組織病理學(xué)分析。結(jié)果表明,FGF10在三轉(zhuǎn)基因小鼠中成功實(shí)現(xiàn)了條件性過表達(dá),導(dǎo)致肺Ⅱ型上皮細(xì)胞過度增殖,肺部出現(xiàn)大面積的肺腺瘤樣組織增生,并且主要集中在遠(yuǎn)端區(qū)域,這和由于K-RAS激活型突變引發(fā)的肺部腫瘤癥狀非常相似。經(jīng)檢測,K-RAS蛋白的表達(dá)量顯著升高,尤其是在腫瘤密集的區(qū)域,其下游轉(zhuǎn)錄因子CREB的表達(dá)也明顯增強(qiáng)。說明FGF10是通過K-RAS基因調(diào)控肺發(fā)育過程的,FGF10的過表達(dá)使其下游RAS-MAPK信號通路過度打開,并最終導(dǎo)致了肺腺瘤樣組織增生的出現(xiàn)。以上研究有利于對生長因子調(diào)控的信號通路分子機(jī)制的深入探討,對肺部相關(guān)腫瘤疾病的治療和抗腫瘤藥物的研發(fā)也具有重要意義。
【關(guān)鍵詞】：三轉(zhuǎn)基因小鼠 FGF10 K-RAS 腫瘤 肺Ⅱ型上皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363;Q25
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-5
• 中文文摘5-8
• 目錄8-10
• 緒論10-22
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-28
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物22-23
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備23
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材23
• 1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)藥品及試劑23-28
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法28-38
• 1.2.1 原位雜交28-32
• 1.2.2 Real-time PCR32-34
• 1.2.3 小鼠肺組織切片的HE染色34-35
• 1.2.4 小鼠肺組織切片的免疫組織化學(xué)顯色35-36
• 1.2.5 轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定36-38
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-56
• 2.1 Real-time PCR對野生型小鼠胚胎發(fā)育各個(gè)時(shí)期FGF10基因的表達(dá)模式檢測38-39
• 2.2 原位雜交定位檢測野生型小鼠胚胎發(fā)育各個(gè)時(shí)期FGF10基因的表達(dá)39-41
• 2.3 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠模型的構(gòu)建41-43
• 2.3.1 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建策略41-43
• 2.4 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定43-44
• 2.5 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠的整肺形態(tài)觀察44-45
• 2.6 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織切片HE染色觀察45-47
• 2.7 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織近端標(biāo)記物檢測47-48
• 2.8 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織遠(yuǎn)端標(biāo)記物檢測48-51
• 2.9 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織FGF10的表達(dá)檢測51-52
• 2.10 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織增殖情況檢測52-53
• 2.11 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織RAS-MAPK信號通路檢測53-56
• 第三章 分析與討論56-60
• 3.1 FGF10基因在野生型小鼠鼠肺發(fā)育各個(gè)時(shí)期的表達(dá)變化56
• 3.2 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10小鼠的構(gòu)建與鑒定56-57
• 3.3 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠組織形態(tài)與近遠(yuǎn)端結(jié)構(gòu)分析57-58
• 3.4 SP-C-rtTA-(Teto)_7-Cre-FGF10三轉(zhuǎn)基因小鼠肺組織中的RAS-MAPK信號通路檢測58-60
• 第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)論60-62
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果66-68
• 致謝68-70
• 個(gè)人簡歷70-71

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：FGF10通過K-RAS調(diào)控小鼠肺發(fā)育的分子機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：358519