本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中調(diào)控PDX1基因表達(dá)的miRNAs的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 實(shí)現(xiàn)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stemcells，bMSCs）向胰島素分泌細(xì)胞（insulin-producing cells，，IPCs）的誘導(dǎo)分化并對(duì)分化過(guò)程中可能調(diào)控胰十二指腸同源異型框基因1（Pancreatic and duodenal homeobox gene1，PDX1）表達(dá)的miRNAs進(jìn)行鑒定。 方法 首先，分離培養(yǎng)bMSCs，應(yīng)用conophylline和尼克酰胺將其誘導(dǎo)分化為IPCs，采用雙硫腙（DTZ）染色和免疫熒光檢測(cè)胰島素的表達(dá)。然后，采用靶基因預(yù)測(cè)軟件miRanda和TargetScan對(duì)調(diào)控PDX1基因表達(dá)的miRNAs進(jìn)行預(yù)測(cè)并通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)鑒定。 qRT-PCR檢測(cè)誘導(dǎo)分化過(guò)程中miRNAs及PDX1的表達(dá)。 結(jié)果 BMSCs傳至3~4代，細(xì)胞均勻分布，形態(tài)規(guī)則均一，呈長(zhǎng)梭形，折光性強(qiáng)。誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞變成圓形、橢圓形，并且成團(tuán)懸起；DTZ染色呈猩紅色，提示細(xì)胞中有鋅離子，參與胰島素的合成；細(xì)胞免疫熒光顯示分化2w后的細(xì)胞內(nèi)有胰島素表達(dá)，顯示綠色熒光。生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)得到miR-149、 miR-346、 miR-133a和miR-133b共4個(gè)可能調(diào)控PDX1表達(dá)的miRNAs，通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其中的miR-149和miR-346能結(jié)合到PDX1mRNA的3'UTR并有效抑制其表達(dá)。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，miR-149和miR-346的表達(dá)水平與PDX1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論 miR-149和miR-346能負(fù)性調(diào)控IPCs誘導(dǎo)分化過(guò)程中PDX1的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：微小RNA 胰十二指腸同源異型框基因1 胰島素分泌細(xì)胞 小鼠
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中文論著摘要4-6
• 英文論著摘要6-8
• 英文縮略語(yǔ)表8-9
• 前言9-10
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法10-16
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 綜述33-41
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 在學(xué)期間科研成績(jī)41-42
• 致謝42-43
• 個(gè)人簡(jiǎn)介43-44

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;Expression of Pdx-1 in bone marrow mesenchymal stem cells promotes differentiation of islet-like cells in vitro[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2006年05期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中調(diào)控PDX1基因表達(dá)的miRNAs的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：357105