目的:觀察發(fā)狀分裂相關(guān)增強子Hey1在骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（BMP9）誘導的小鼠間充質(zhì)干細胞（MSCs）C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:包裝Hey1、BMP9以及GFP的過表達慢病毒,并分別作用于C3H10T1/2細胞,RT-PCR和Western blot檢測Hey1、BMP9以及GFP的慢病毒是否包裝成功,堿性磷酸酶（ALP）檢測早期成骨指標ALP的變化,茜素紅S染色檢測晚期成骨指標鈣鹽沉積,MTT檢測Hey1對BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞增值的影響,流式細胞術(shù)檢測Hey1對BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞周期的影響。結(jié)果:Hey1、BMP9以及GFP的慢病毒包裝成功;在成骨分化早期,過表達Hey1基因可促進BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞的成骨分化與增殖;在成骨分化晚期,過表達Hey1基因可促進BMP9誘導的C3H10T1/2細胞的成骨分化,并將BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞周期阻滯在G1期。結(jié)論:Hey1基因可參與調(diào)控BMP9誘導的小鼠C3H10T1/2細胞的早晚期成骨分化,并對細胞的增殖與周期有一定的影響。 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2015,35(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Hey1、BMP9以及GFP的過表達慢病毒包裝成功Fig．1TheexpressionofGFP，BMP9andHey1

2015，35(6)唐大剛等:Hey1基因參與調(diào)控BMP9誘導的C3H10T1/2細胞成骨分化圖2Hey1基因影響B(tài)MP9誘導的C3H10T1/2細胞早期成骨分化Fig．2EffectofHey1geneonBMP9-inducedearlyosteogenicdifferentiationofC3H10T1/2cells成骨指標鈣鹽沉積。結(jié)果顯示，單獨BMP9組可明顯誘導鈣鹽沉積，而LV5-Hey1促進了BMP9誘導的C3H10T1/2細胞晚期成骨分化(圖3)。綜上所述，Hey1基因可促進BMP9誘導的小鼠C3H10T1/2細胞早晚期成骨分化。2．4Hey1基因?qū)MP9誘導的C3H10T1/2細胞增殖的影響有研究報道，Hey1基因可影響細胞的增殖［13-14］。在Hey1基因影響B(tài)MP9誘導的小鼠C3H10T1/2細胞早晚期成骨分化的基礎上進一步探討Hey1基因?qū)MP9參與調(diào)控的細胞增殖的影響，用LV5-Hey1和LV5-GFP感染C3H10T1/2細胞24h后，加入適當?shù)味?30%)的LV5-BMP9，分別在處理后24、48和72h用圖3Hey1基因影響B(tài)MP9誘導的C3H10T1/2細胞晚期成骨分化Fig．3EffectofHey1geneonBMP9-inducedlaterosteogenicdifferentiationofC3H10T1/2cellsMTT方法檢測細胞的增值，結(jié)果顯示，單獨BMP9組對細胞的增殖有部分抑制作用，而LV5-Hey1促進了BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞的增殖(P＜0．05)(圖4)。圖4Hey1基因影響B(tài)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞的增殖Fig．4EffectofHey1geneonBMP9-regulatedproliferationofC3H10T1/2cells2．5Hey1基因?qū)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞周期的影響在上述探討Hey1基因?qū)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞增值的影響的基礎上，進一步探討Hey1基因?qū)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞周期的作用。用LV5-Hey1和LV5-GFP感染C3H10T1/2細胞24h后，加入適當?shù)味鹊腖V5-BMP9，分別在處理后4、5、6和7d通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期的變化，結(jié)果顯示，在晚期，單獨BMP9組可縮短細胞的G1期從而促進?

＝峁?允荊?ザ繠MP9組可明顯誘導鈣鹽沉積，而LV5-Hey1促進了BMP9誘導的C3H10T1/2細胞晚期成骨分化(圖3)。綜上所述，Hey1基因可促進BMP9誘導的小鼠C3H10T1/2細胞早晚期成骨分化。2．4Hey1基因?qū)MP9誘導的C3H10T1/2細胞增殖的影響有研究報道，Hey1基因可影響細胞的增殖［13-14］。在Hey1基因影響B(tài)MP9誘導的小鼠C3H10T1/2細胞早晚期成骨分化的基礎上進一步探討Hey1基因?qū)MP9參與調(diào)控的細胞增殖的影響，用LV5-Hey1和LV5-GFP感染C3H10T1/2細胞24h后，加入適當?shù)味?30%)的LV5-BMP9，分別在處理后24、48和72h用圖3Hey1基因影響B(tài)MP9誘導的C3H10T1/2細胞晚期成骨分化Fig．3EffectofHey1geneonBMP9-inducedlaterosteogenicdifferentiationofC3H10T1/2cellsMTT方法檢測細胞的增值，結(jié)果顯示，單獨BMP9組對細胞的增殖有部分抑制作用，而LV5-Hey1促進了BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞的增殖(P＜0．05)(圖4)。圖4Hey1基因影響B(tài)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞的增殖Fig．4EffectofHey1geneonBMP9-regulatedproliferationofC3H10T1/2cells2．5Hey1基因?qū)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞周期的影響在上述探討Hey1基因?qū)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞增值的影響的基礎上，進一步探討Hey1基因?qū)MP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞周期的作用。用LV5-Hey1和LV5-GFP感染C3H10T1/2細胞24h后，加入適當?shù)味鹊腖V5-BMP9，分別在處理后4、5、6和7d通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期的變化，結(jié)果顯示，在晚期，單獨BMP9組可縮短細胞的G1期從而促進細胞的增殖，而LV5-Hey1使BMP9調(diào)控的C3H10T1/2細胞的周期阻滯在G1期(P＜0．05)(圖5)。3討論在BMPs家族成員中BMP2和BMP7因被證實具有明確的誘導成骨分化的作用而應用于臨床，課題組17

【參考文獻】：
期刊論文
[1]RUNX2對BMP9誘導的間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2成骨分化的影響[J]. 趙艷芳,宋濤,劉躍亮,羅進勇.  中國生物工程雜志. 2013(02)
[2]p38蛋白激酶參與BMP9誘導的C3H10T1/2細胞成骨分化[J]. 徐道晶,王錦,何娟文,胡晶,翁亞光,羅進勇.  中國生物工程雜志. 2011(05)



本文編號：3568920