背景：細(xì)胞間通訊可以確保組織內(nèi)不同細(xì)胞的功能相互協(xié)調(diào)。細(xì)胞間通訊包括可溶性因子、隧道納米管和細(xì)胞微泡等，它們都可以在不同細(xì)胞間水平傳遞細(xì)胞表面分子或細(xì)胞質(zhì)。微泡是一種大多數(shù)細(xì)胞在生理或病理狀態(tài)下都會(huì)分泌的圓形的質(zhì)膜片斷，包括外泌體和微粒或脫落小泡[1,2]。目前，對(duì)微泡的生物學(xué)功能了解甚少，有研究認(rèn)為它主要參與細(xì)胞分泌、免疫調(diào)節(jié)、凝血、細(xì)胞間通訊等生理或病理過程[3-5]。微泡是一種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其生成、豐度、大小、內(nèi)含物和生物學(xué)功能等均存在異質(zhì)性。微泡內(nèi)含蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等多種生物大分子[6-9]，表面還攜帶母體細(xì)胞來源的的抗原、脂質(zhì)等，這些均有利于其在循環(huán)中與受體細(xì)胞融合，水平運(yùn)輸外源的蛋白質(zhì)和核酸[10-13]，參與細(xì)胞間通訊并調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)功能[8,9,14,15]。此外，有研究報(bào)道微泡介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊在動(dòng)脈粥樣硬化的形成中扮演了重要角色[15]。最近的研究發(fā)現(xiàn)微泡內(nèi)含線粒體DNA和染色體DNA[16,17]。Waldenstrom等[17]進(jìn)一步報(bào)道了在心肌細(xì)胞微泡內(nèi)存在的染色體DNA可以轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)，但這些轉(zhuǎn)移的微泡DNA是否具有功能并不... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

細(xì)胞及其微泡流式細(xì)胞分析結(jié)果

圖 2-3 血漿及細(xì)胞微泡中蛋白標(biāo)志物的表達(dá).3 討 論基于上述研究我們發(fā)現(xiàn)，根據(jù)微泡本身特有的理化性質(zhì)，通過多步差速離心法從血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中成功分離微泡，該方法與之前的報(bào)道一致[8, 9, 15]。負(fù)染電鏡檢查與流式細(xì)胞術(shù)均發(fā)現(xiàn)在微泡內(nèi)存在致密結(jié)構(gòu)，可能為核酸、蛋白等生物子。由于流式細(xì)胞術(shù)不能區(qū)分小于200 nm的單個(gè)顆粒，這一局限使我們應(yīng)用此技檢測分析了大于200 nm的微泡顆粒，但這一方法在之前已有明確的報(bào)道[18SG101、Flotillin-1和HSP70等與微泡的生成和釋放密切相關(guān)，CD63為細(xì)胞微泡的成分，AGO2為細(xì)胞微泡內(nèi)miRNA的共連接蛋白[15]，因此，檢測這些微泡相關(guān)蛋夠正確反應(yīng)微泡的存在。.4 小 結(jié)

前無明顯變化，見圖 3-1B。該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)微泡攜帶的 DNA 并非來吸附的 DNA，而是來源于微泡內(nèi)。3）同時(shí)，我們用親脂性的膜染料 DiI 與微泡孵育后，其熒光檢測信號(hào)較增強(qiáng)，如圖 3-1C 所示，這進(jìn)一步說明微泡的存在及其結(jié)構(gòu)的完整性。.2.1.2 雙色熒光激活細(xì)胞分選器檢測微泡 DNA 結(jié)果了進(jìn)一步證實(shí)微泡內(nèi)存在 DNA，我們將 DNA 染料 AO 與微泡膜染料 D然后檢測熒光信號(hào)以觀察兩種染料是否可以共染。如圖 3-2 所示，共染 90%，較未染與單染微泡均明顯增強(qiáng)，說明兩種染料可以共染微泡，進(jìn)泡內(nèi) DNA 的存在。.2.1.3 細(xì)胞存活率分析了證實(shí)微泡 DNA 并非來源于凋亡/死亡細(xì)胞殘留的 DNA，根據(jù) PI 染料胞結(jié)合而不與存活細(xì)胞結(jié)合的特點(diǎn)，我們使用 PI 染料檢測分離微泡前平活率。如圖 3-3 所示，平滑肌細(xì)胞在 PI 染色前后檢測信號(hào)無明顯變化，胞為存活的細(xì)胞，它所分泌的微泡所攜帶 DNA 并非來源于凋亡或死亡的


本文編號(hào)：3567273