背景：細胞間通訊可以確保組織內(nèi)不同細胞的功能相互協(xié)調(diào)。細胞間通訊包括可溶性因子、隧道納米管和細胞微泡等，它們都可以在不同細胞間水平傳遞細胞表面分子或細胞質(zhì)。微泡是一種大多數(shù)細胞在生理或病理狀態(tài)下都會分泌的圓形的質(zhì)膜片斷，包括外泌體和微�；蛎撀湫∨輀1,2]。目前，對微泡的生物學功能了解甚少，有研究認為它主要參與細胞分泌、免疫調(diào)節(jié)、凝血、細胞間通訊等生理或病理過程[3-5]。微泡是一種亞細胞結(jié)構(gòu)，其生成、豐度、大小、內(nèi)含物和生物學功能等均存在異質(zhì)性。微泡內(nèi)含蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等多種生物大分子[6-9]，表面還攜帶母體細胞來源的的抗原、脂質(zhì)等，這些均有利于其在循環(huán)中與受體細胞融合，水平運輸外源的蛋白質(zhì)和核酸[10-13]，參與細胞間通訊并調(diào)節(jié)受體細胞的生物學功能[8,9,14,15]。此外，有研究報道微泡介導的細胞間通訊在動脈粥樣硬化的形成中扮演了重要角色[15]。最近的研究發(fā)現(xiàn)微泡內(nèi)含線粒體DNA和染色體DNA[16,17]。Waldenstrom等[17]進一步報道了在心肌細胞微泡內(nèi)存在的染色體DNA可以轉(zhuǎn)移至受體細胞的細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)，但這些轉(zhuǎn)移的微泡DNA是否具有功能并不... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

細胞及其微泡流式細胞分析結(jié)果

圖 2-3 血漿及細胞微泡中蛋白標志物的表達.3 討 論基于上述研究我們發(fā)現(xiàn)，根據(jù)微泡本身特有的理化性質(zhì)，通過多步差速離心法從血漿和細胞培養(yǎng)上清液中成功分離微泡，該方法與之前的報道一致[8, 9, 15]。負染電鏡檢查與流式細胞術均發(fā)現(xiàn)在微泡內(nèi)存在致密結(jié)構(gòu)，可能為核酸、蛋白等生物子。由于流式細胞術不能區(qū)分小于200 nm的單個顆粒，這一局限使我們應用此技檢測分析了大于200 nm的微泡顆粒，但這一方法在之前已有明確的報道[18SG101、Flotillin-1和HSP70等與微泡的生成和釋放密切相關，CD63為細胞微泡的成分，AGO2為細胞微泡內(nèi)miRNA的共連接蛋白[15]，因此，檢測這些微泡相關蛋夠正確反應微泡的存在。.4 小 結(jié)

前無明顯變化，見圖 3-1B。該結(jié)果進一步證實微泡攜帶的 DNA 并非來吸附的 DNA，而是來源于微泡內(nèi)。3）同時，我們用親脂性的膜染料 DiI 與微泡孵育后，其熒光檢測信號較增強，如圖 3-1C 所示，這進一步說明微泡的存在及其結(jié)構(gòu)的完整性。.2.1.2 雙色熒光激活細胞分選器檢測微泡 DNA 結(jié)果了進一步證實微泡內(nèi)存在 DNA，我們將 DNA 染料 AO 與微泡膜染料 D然后檢測熒光信號以觀察兩種染料是否可以共染。如圖 3-2 所示，共染 90%，較未染與單染微泡均明顯增強，說明兩種染料可以共染微泡，進泡內(nèi) DNA 的存在。.2.1.3 細胞存活率分析了證實微泡 DNA 并非來源于凋亡/死亡細胞殘留的 DNA，根據(jù) PI 染料胞結(jié)合而不與存活細胞結(jié)合的特點，我們使用 PI 染料檢測分離微泡前平活率。如圖 3-3 所示，平滑肌細胞在 PI 染色前后檢測信號無明顯變化，胞為存活的細胞，它所分泌的微泡所攜帶 DNA 并非來源于凋亡或死亡的


本文編號：3567273