本文關鍵詞：富集舌癌干細胞動物模型的建立與干細胞標志Oct-4檢測的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 1、建立富集舌癌干細胞的動物模型，解決舌癌干細胞研究中因癌干細胞數(shù)量少所致的瓶頸問題。 2、檢測Tca8113細胞系癌干細胞標志的表達情況,為從細胞系中分離舌癌干細胞提供前期實驗依據(jù)。 方法：選取舌癌Tca-8113細胞系為研究對象,以化療藥物干預為基本手段,采用裸鼠體內(nèi)微環(huán)境建立富集舌癌干細胞模式,主要構建模式如下：建立舌癌裸鼠皮下移植瘤動物模型,采用裸鼠腋窩皮下注射癌細胞,并將荷瘤鼠隨機分為對照組和實驗組,對照組不予化療藥物干預,只按相同方式注射等量生理鹽水,實驗組給予低劑量化療富集舌癌干細胞,采用環(huán)磷酰胺腹腔注射,劑量100mg/kg,8天為一個周期,連續(xù)注射3天,停藥5天,腫瘤最大直徑達1.5cm時取材原代培養(yǎng),并在體連續(xù)反復傳代5次,分別命名為Tca-8113/CTX P1+～Tca-8113/CTX P5+,評價各代的體內(nèi)成瘤能力,同時用球囊形成率來證實經(jīng)環(huán)磷酰胺富集的舌癌細胞中癌干細胞的比率,最后通過實時熒光RT-PCR方法檢測干細胞標志Oct4的mRNA表達。 結果：在裸鼠兩側(cè)腋窩皮下注射Tca-8113親代細胞后,成瘤率為100%,形成的異種移植瘤體內(nèi)反復連續(xù)傳代5次,同時給予低劑量化療壓力。1至5代Tca-8113細胞的成瘤時間分別是11、9、7、7、5天,體內(nèi)成瘤能力逐步增強,利用100mg/Kg環(huán)磷酰胺富集的第五代舌癌細胞的體內(nèi)成瘤能力最強；而1～5代腫瘤細胞在體內(nèi)的生長速度也大致呈遞增趨勢。在球囊形成實驗中,第1、2、3代細胞TCA-8113/CTX P1+、TCA-8113/CTX P2+、TCA-8113/CTX P3+細胞在第3天開始逐漸皺縮、死亡,只有第4、第5代細胞能形成“球囊”,球囊形成率分別為：(8.25±3.41)%,(11.23±4.47)%,n=3,并表達出較強的“干性”,通過對第4、第5代細胞Oct-4基因的mRNA進行檢測,其表達顯著增加,第5代(Tca-8113/CTX P5)的Oct4基因mRNA水平最高,顯著高于對照組(P0.05)。 結論：裸鼠皮下移植瘤傳代聯(lián)合環(huán)磷酰胺干預模式,可有效富集舌癌細胞系Tca-8113細胞中癌干細胞特性細胞群,在體內(nèi)成瘤能力的比較中逐代增強；Oct-4基因很有可能是舌癌干細胞特異性標志之一。
【關鍵詞】：舌癌 癌干細胞 富集 干細胞標志
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.86;R-332
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 前言8-10
• 第一部分 裸鼠皮下移植瘤富集癌干細胞模型的建立及富集的5代舌癌細胞的獲得10-21
• 1 材料與方法10-12
• 2 實驗方法12-15
• 3 實驗結果15-17
• 4 討論17-21
• 第二部分 實時熒光RT-PCR檢測干細胞標志的實驗研究21-32
• 1 材料與方法21-23
• 2 實驗方法23-27
• 3 實驗結果27-30
• 4 討論30-32
• 全文結論32-33
• 參考文獻33-37
• 附錄1 綜述37-50
• 參考文獻44-50
• 附錄2 中英文縮略詞表50-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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  本文關鍵詞：富集舌癌干細胞動物模型的建立與干細胞標志Oct-4檢測的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：356279