發(fā)布時(shí)間：2017-05-10 22:02

  本文關(guān)鍵詞：人骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)來源于早期中胚層,是具有自我復(fù)制和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,它存在于多種組織中。MSC可在特定的條件下誘導(dǎo)分化為骨髓基質(zhì)細(xì)胞如成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞等三個(gè)胚層細(xì)胞,已經(jīng)成為組織工程和再生醫(yī)學(xué)細(xì)胞治療的主要候選干細(xì)胞之一。MSC具有低免疫原性和較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能,可以應(yīng)用于減少移植物的免疫排斥,研究腫瘤免疫,并可以用來治療相關(guān)免疫疾病等方面。外泌體(exosome)是很小的囊泡,直徑大約40-100nim,在生理或病理情況下,由多種細(xì)胞內(nèi)膜(endosomal membrane)以出芽方式形成的多泡體,參與細(xì)胞間的信息交流,并參與到多種生理病理過程中。既往很多研究也已證明外泌體的治療作用。現(xiàn)有研究已證明MSC分泌的外泌體可以減少心肌損傷范圍、保護(hù)急性腎小管損傷、促進(jìn)神經(jīng)再生、減少肺損傷等方面有重要作用。有關(guān)MSC來源的外泌體的研究報(bào)道尚少,而對(duì)異基因MSC輸注后在體內(nèi)的增殖、分化、壽命以及以此帶來的免疫調(diào)節(jié)功能的變化的認(rèn)識(shí)尚不很明確,臨床應(yīng)用所產(chǎn)生的問題陷入瓶頸期。而對(duì)外泌體的生物特性與功能機(jī)制的深入研究對(duì)認(rèn)識(shí)并解決MSC應(yīng)用中產(chǎn)生的問題有重要作用,并且,外泌體的應(yīng)用較之MSC直接應(yīng)用更為安全,可以開啟非細(xì)胞治療的方法。 目的：本研究旨在探討正常人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)分泌的外泌體(exosomes)免疫調(diào)節(jié)功能、支持血管形成、及造血支持能力。 方法：(1)采用貼壁、傳代培養(yǎng)的方法從正常人骨髓組織中獲取相對(duì)純化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；(2)收集BMMSC P4-P6代上清提取exosome,透射電鏡觀察其形態(tài),蛋白印跡法檢測(cè)其表面特異標(biāo)志CD9, bicinchoninic acid (BCA)方法定量檢測(cè)外泌體蛋白分泌量；(3) exosomes與正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)作用72小時(shí)后用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)檢測(cè)PBMC分泌的γ-干擾素(IFN-γ)；(4)實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)外泌體內(nèi)免疫相關(guān)microRNA表達(dá)；(5)共聚焦顯微鏡觀察外泌體與人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)的作用方式,與IUVEC共培養(yǎng)后觀察其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成；裸鼠體內(nèi)試驗(yàn)檢測(cè)exosomes對(duì)血管形成能力的作用；(6)從臍帶血中磁珠分離純化CD34+造血干細(xì)胞,與exosomes共同培養(yǎng)一周后檢測(cè)其對(duì)擴(kuò)增CD34+細(xì)胞能力檢測(cè)及CFU克隆形成實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：正常人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體近似圓形,直徑在40nm-160nm之間,表達(dá)表面標(biāo)志CD9,其蛋白分泌量與接種細(xì)胞數(shù)呈線性關(guān)系,可抑制PBMC分泌IFN-γ(P0.01),內(nèi)含有免疫相關(guān)microRNA如miR301、 miR22、 miR-let-7a等,能促進(jìn)HUVEC網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成及血管形成。與臍血來源的CD34+造血干細(xì)胞共培養(yǎng)結(jié)果顯示,BMMSCs外泌體具有明顯擴(kuò)增CD34+細(xì)胞能力和促進(jìn)CFU克隆形成能力。 結(jié)論：BMMSC-exosome具有免疫調(diào)節(jié)功能、支持血管形成與造血支持作用。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 外泌體 免疫調(diào)節(jié) 血管形成 造血
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-28
• 結(jié)果28-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞與其分泌的外泌體的生物學(xué)特性綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 附錄一 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑52-56
• 附錄二 主要溶液配制56-59
• 附錄三 英文縮略語表59-61
• 附錄四 在學(xué)期間發(fā)表文章61-62
• 致謝62-63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 常靜;雷寒;陳建斌;賈鋒鵬;;人間充質(zhì)干細(xì)胞免疫學(xué)性質(zhì)的對(duì)比研究[J];臨床心血管病雜志;2007年10期

  本文關(guān)鍵詞：人骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體特性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：355542