本文關(guān)鍵詞：人廢棄胚胎群體培養(yǎng)及胚胎干細(xì)胞系的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自1998年Thomson實(shí)驗(yàn)室建立首株人胚胎干細(xì)胞系以來(lái),全世界范圍內(nèi)已經(jīng)相繼建立1200多株不同的人胚胎干細(xì)胞系。然而,研究者們?nèi)灾铝τ诮⑿碌娜伺咛ジ杉?xì)胞系,尤其是HLA配型及各種族人群的。人胚胎干細(xì)胞在體內(nèi)外具有自我更新及分化的能力,并且能夠分化成內(nèi)胚層、外胚層、中胚層的各種組織器官的細(xì)胞,使其具有將來(lái)進(jìn)行細(xì)胞替代治療的前景。同時(shí),多能性胚胎干細(xì)胞的這些特性使其能夠成為研究細(xì)胞分化的分子機(jī)制及探索正常胚胎發(fā)育過(guò)程中混合型藥物對(duì)其生物學(xué)發(fā)育影響的有效工具。但是,在進(jìn)行人胚胎干細(xì)胞建立的過(guò)程中,我們必須面臨的問(wèn)題是胚胎的來(lái)源。自Lerou等報(bào)道用體外受精治療中剩余的形態(tài)差、發(fā)育潛能低的胚胎建系成功以來(lái),已經(jīng)有大量的研究者關(guān)注于使用廢棄胚胎來(lái)進(jìn)行人胚胎干細(xì)胞系的建立,因其能夠避免部分倫理學(xué)上的紛爭(zhēng)。但是,我們?nèi)圆坏貌幻鎸?duì)的問(wèn)題是廢棄胚胎的低囊胚形成率及較差的囊胚質(zhì)量。 目前,有一些報(bào)道將胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng),選擇出最適宜胚胎發(fā)育的空間及密度能夠有效促進(jìn)胚胎的進(jìn)一步發(fā)育,從而提高臨床妊娠率。同樣,在動(dòng)物中(如鼠、羊、牛等)也發(fā)現(xiàn)相同的現(xiàn)象,分析其原因可能為胚胎之間分泌的一些小分子物質(zhì)能夠促進(jìn)胚胎的發(fā)育并提高胚胎的潛能。但是,對(duì)于分泌的物質(zhì)的成分仍不十分清楚。現(xiàn)在,對(duì)于廢棄胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)并沒(méi)有系統(tǒng)完整的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的為在固定培養(yǎng)液體積的條件下根據(jù)胚胎的數(shù)量進(jìn)行分組培養(yǎng)以期說(shuō)明群體培養(yǎng)對(duì)于廢棄胚胎發(fā)育潛能的影響。從而,能夠?yàn)轶w外受精治療中的胚胎培養(yǎng)提供參考。同時(shí),使我們能夠更加有效地利用廢棄胚胎來(lái)建立更多的人胚胎干細(xì)胞系以供科研使用。 目的： 探討對(duì)IVF/ICSI周期中的廢棄胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)的結(jié)果及其對(duì)胚胎發(fā)育潛能的影響。利用廢棄胚胎建立人胚胎干細(xì)胞系。 方法：1.收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer, IVF-ET)和卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射-胚胎移植(intracytoplasmic sperm injection, ICSI-ET)患者無(wú)移植及冷凍價(jià)值的廢棄胚胎,均經(jīng)過(guò)患者知情同意后用于實(shí)驗(yàn)。將收集到的胚胎按照來(lái)源進(jìn)行分組,并在組內(nèi)按照單個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)及四個(gè)群體培養(yǎng)進(jìn)行分組,在體積固定的培養(yǎng)液中,經(jīng)序貫培養(yǎng)至囊胚。 2.采用機(jī)械法分離囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán),將其種植于小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的飼養(yǎng)層上,采用機(jī)械法反復(fù)傳代純化,建立人胚胎干細(xì)胞系,并完成鑒定。 結(jié)果： 1.本實(shí)驗(yàn)共收集我中心廢棄胚胎1223枚,經(jīng)囊胚培養(yǎng)形成囊胚221枚(18.07%),其中優(yōu)質(zhì)囊胚92枚(7.52%)。各組間患者的基本情況無(wú)明顯差異。 2.1PN胚胎的囊胚形成率及優(yōu)質(zhì)囊胚形成率明顯高于2PN胚胎和3PN胚胎(P均0.05)。在1PN組,與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較,兩個(gè)及三個(gè)胚胎培養(yǎng)的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率增高(P0.05)。在2PN組,與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較,兩個(gè)及三個(gè)胚胎培養(yǎng)的囊胚形成率增高(P0.05),同時(shí),四個(gè)胚胎培養(yǎng)的囊胚形成率低于三個(gè)胚胎培養(yǎng)組(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較,三個(gè)胚胎培養(yǎng)組的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率增高(P0.05)。在3PN組,與單個(gè)胚胎培養(yǎng)組相比較,三個(gè)胚胎培養(yǎng)組的胚胎形成率升高(P＜0.05),與三個(gè)胚胎培養(yǎng)組比較,兩個(gè)和四個(gè)胚胎培養(yǎng)組均降低(P＜0.05)。 3.利用廢棄胚胎形成的囊胚,采用機(jī)械法分離內(nèi)細(xì)胞團(tuán),將其種植于密度為3.5×105/cm2飼養(yǎng)層上,建立2株人胚胎干細(xì)胞系,并完成鑒定。 結(jié)論： 1.對(duì)胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)能夠一定程度上提高囊胚形成率及囊胚質(zhì)量。三個(gè)胚胎進(jìn)行群體培養(yǎng)為最適宜的數(shù)量。次之,兩個(gè)進(jìn)行群體培養(yǎng)。單個(gè)及四個(gè)進(jìn)行比較,無(wú)明顯差異。 2.利用廢棄胚胎能夠有效建立人胚胎干細(xì)胞系。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細(xì)胞 群體培養(yǎng) 胚胎
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R321.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-28
• 結(jié)果28-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述一42-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 綜述二52-59
• 參考文獻(xiàn)57-59
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59-60
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章及參加會(huì)議情況60
• 參與課題情況60-61
• 致謝61

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：355202