本文關(guān)鍵詞：fimH基因?qū)δ蚵分虏⌒源竽c埃希菌1型菌毛粘附功能影響的初步探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 尿路致病性大腸埃希菌(UPEC)是引起尿路感染的主要致病菌,UPEC通過(guò)多種毒力因子引起宿主損害,其中菌毛在細(xì)菌粘附、侵襲等方面起著重要作用,尤以1型菌毛最常見(jiàn),而fimH基因編碼的1型菌毛頂端FimH蛋白粘附于人尿道上皮細(xì)胞是引發(fā)尿路感染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)�；趂imH基因在1型菌毛粘附過(guò)程中所起的重要作用,本研究的目的是探討fimH基因?qū)PEC1型菌毛粘附功能的影響,比較1型菌毛粘附陽(yáng)性與陰性菌株的基因變化,為治療泌尿系統(tǒng)感染和相應(yīng)疫苗的研制打下基礎(chǔ)。 方法 收集天津地區(qū)三家三級(jí)甲等醫(yī)院(天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院、天津市一中心醫(yī)院、天津市兒童醫(yī)院)2012年1月至2013年1月非植入尿?qū)Ч芑颊吣驑?biāo)本分離的非重復(fù)感染大腸埃希菌共171株進(jìn)行研究,通過(guò)PCR方法進(jìn)行fimH基因片段擴(kuò)增與瓊脂糖凝膠電泳,判斷fimH基因攜帶情況；UPEC表達(dá)1型菌毛的能力通過(guò)與酵母細(xì)胞的粘附實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè),通過(guò)酵母細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)1型菌毛的粘附情況,比較二者的關(guān)系；針對(duì)所有fimH基因陽(yáng)性、1型菌毛粘附測(cè)定陰性的菌株進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn),檢測(cè)fimH基因是否發(fā)生轉(zhuǎn)錄,研究fimH基因轉(zhuǎn)錄對(duì)1型菌毛粘附作用的影響；將最后所得的fimH基因陽(yáng)性、1型菌毛粘附測(cè)定陰性、fimH基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄的菌株,與隨機(jī)選取的fimH基因陽(yáng)性、1型菌毛粘附測(cè)定陽(yáng)性的對(duì)照菌株,進(jìn)行fimH基因序列測(cè)定,進(jìn)行核苷酸與氨基酸序列分析,研究fimH基因突變及氨基酸突變對(duì)1型菌毛粘附作用的影響。 結(jié)果 天津地區(qū)171株大腸埃希菌中,通過(guò)fimH基因片段擴(kuò)增發(fā)現(xiàn),29株fimH基因陰性,142株fimH基因陽(yáng)性,fimH基因攜帶率達(dá)83%。通過(guò)與酵母細(xì)胞的粘附實(shí)驗(yàn),其中98株1型菌毛粘附測(cè)定陽(yáng)性,73株1型菌毛粘附測(cè)定陰性,1型菌毛粘附率57%。171株大腸埃希菌中,所有1型菌毛粘附菌株均攜帶fimH基因,但是,攜帶fimH基因的菌株不一定發(fā)生粘附。對(duì)44株fimH基因陽(yáng)性、1型菌毛粘附測(cè)定陰性的菌株進(jìn)行RT-PCR,結(jié)果8株fimH基因未發(fā)生轉(zhuǎn)錄,36株fimH基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄。由此可見(jiàn),攜帶fimH基因未發(fā)生轉(zhuǎn)錄而導(dǎo)致1型菌毛粘附陰性的菌株占18%。對(duì)fimH基因陽(yáng)性、1型菌毛粘附測(cè)定陰性、fimH基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄的36株菌株(下稱(chēng)粘附陰性組),與隨機(jī)選取的fimH基因陽(yáng)性、粘附陽(yáng)性的37株對(duì)照菌株(含CFT073,下稱(chēng)粘附陽(yáng)性組)進(jìn)行fimH基因測(cè)序,序列比對(duì)結(jié)果顯示,從34bp—873bp位點(diǎn),在53個(gè)多態(tài)位點(diǎn)共發(fā)生62個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNP)改變。氨基酸比對(duì)結(jié)果顯示,其中,9個(gè)SNP改變共引起9種氨基酸改變。分別位于第49、51、90、94、102、128、187、190、219位氨基酸位點(diǎn),其余53個(gè)SNP改變未引起氨基酸改變。其中第94位、第102位和第187位氨基酸位點(diǎn)均易發(fā)生突變,以上三個(gè)位點(diǎn)兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.11,0.08和0.45,P0.05)；第49位、第90位與第128位突變率較低,以上3個(gè)位點(diǎn)兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.21,0.00和1.47,P0.05)；第51位粘附陰性組與粘附陽(yáng)性組突變率分別為22.2%,51.4%,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.64,P=0.010),后者較前者該位點(diǎn)易發(fā)生突變；第190位與第219位粘附陰性組突變率分別為16.7%,19.4%,而粘附陽(yáng)性組未見(jiàn)突變,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.69和5.87,P0.05)。粘附陰性組其余23株菌無(wú)法用單核苷酸多態(tài)性(SNP)改變解釋其粘附陰性。 結(jié)論 所有1型菌毛粘附陽(yáng)性的UPEC菌株均攜帶fimH基因,說(shuō)明fimH基因在1型菌毛的粘附過(guò)程中發(fā)揮了不可或缺的作用；除了轉(zhuǎn)錄調(diào)控外,fimH基因的突變與缺失可以影響1型菌毛的粘附功能；本研究發(fā)現(xiàn)了可能引起1型菌毛粘附功能改變的常見(jiàn)突變位點(diǎn)；粘附過(guò)程中除fimH基因這一關(guān)鍵因素外,其他基因可能也會(huì)影響1型菌毛的粘附功能。
【關(guān)鍵詞】：尿路致病性大腸埃希菌 fimH基因 1型菌毛 粘附
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R378.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、UPEC 1型菌毛粘附功能與fimH基因調(diào)查研究14-22
• 1.1 材料和方法15-18
• 1.1.1 菌株來(lái)源與鑒定15
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑耗材15-16
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)流程16
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)方法16-18
• 1.2 結(jié)果18-20
• 1.2.1 fimH基因攜帶情況18-19
• 1.2.2 1型菌毛粘附情況19
• 1.2.3 fimH基因攜帶情況與1型菌毛粘附情況之間的關(guān)系19-20
• 1.3 討論20-21
• 1.4 小結(jié)21-22
• 二、UPEC 1型菌毛粘附過(guò)程中fimH基因的作用分析22-32
• 2.1 材料和方法22-26
• 2.1.1 菌株來(lái)源與鑒定22
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器與試劑耗材22
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)流程22-23
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 2.2 結(jié)果26-30
• 2.2.1 fimH基因的RT-PCR結(jié)果26
• 2.2.2 DNA序列比對(duì)結(jié)果26
• 2.2.3 氨基酸序列比對(duì)結(jié)果26-30
• 2.3 討論30-31
• 2.4 小結(jié)31-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明36-37
• 綜述37-52
• 綜述參考文獻(xiàn)46-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 楊東靖;葛新;李力;;尿道致病性大腸桿菌I型菌毛的研究進(jìn)展[J];中國(guó)慢性病預(yù)防與控制;2011年01期

  本文關(guān)鍵詞：fimH基因?qū)δ蚵分虏⌒源竽c埃希菌1型菌毛粘附功能影響的初步探索，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：354856