目的克隆、原核表達(dá)剛地弓形蟲滑行相關(guān)蛋白45 （Tg GAP45）基因,檢測(cè)重組蛋白r Tg GAP45的免疫反應(yīng)性。方法提取剛地弓形蟲RH株速殖子總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)Tg GAP45基因全長(zhǎng)編碼序列的開放閱讀框設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增Tg GAP45基因。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后連接入pET30a （+）載體,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌（E. coli） DH5α,陽(yáng)性菌落經(jīng)PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定。將重組質(zhì)粒pET30a （+）Tg GAP45轉(zhuǎn)化至E.coli BL21 （DE3）感受態(tài)細(xì)胞,以異丙基βD硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）結(jié)合考馬斯亮藍(lán)染色檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物,分別以抗His標(biāo)簽抗體、人抗弓形蟲血清或小鼠抗弓形蟲可溶性速殖子抗原（STAg）血清為一抗,蛋白質(zhì)印跡（Western blotting）鑒定重組蛋白免疫反應(yīng)性。結(jié)果剛地弓形蟲GAP45基因的cDNA開放式閱讀框全長(zhǎng)為738 bp, PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示,在750 bp處有一條特異性擴(kuò)增條帶（帶His標(biāo)簽）,與預(yù)期大小相符。菌落PCR、雙酶切以及測(cè)序結(jié)果均表明重組質(zhì)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2019,37(05)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

TgGAP45基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]剛地弓形蟲滑行相關(guān)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 李潤(rùn)花,殷國(guó)榮.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2016(05)
[2]剛地弓形蟲棒狀體蛋白17（ROP17）真核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及其激酶活性分析[J]. 王海龍,殷麗天,張鐵娥,關(guān)麗,孟曉麗,劉紅麗,殷國(guó)榮.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2014(01)
[3]剛地弓形蟲肌動(dòng)蛋白基因的克隆與表達(dá)[J]. 李潤(rùn)花,郝海霞,王海龍,孟曉麗,申金雁,殷國(guó)榮.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2013(05)
[4]弓形蟲復(fù)合黏膜疫苗鼻內(nèi)免疫小鼠抵抗弓形蟲感染作用的觀察[J]. 殷國(guó)榮,孟曉麗,馬廣源,馬曉明.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2007(04)

碩士論文
[1]剛地弓形蟲滑行相關(guān)蛋白45基因的生物信息學(xué)分析、克隆表達(dá)及重組蛋白的免疫保護(hù)性研究[D]. 關(guān)麗.山西醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3545012