本文關(guān)鍵詞：重組辛德畢斯病毒的制備及其功能特性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：辛德畢斯（Sindbis virus, SINV）病毒隸屬于披膜病毒科（Togavirudea）甲病毒屬（Alphavirus），感染人類可引發(fā)發(fā)熱、倦怠、頭痛、關(guān)節(jié)痛和皮疹等癥狀，被稱為“辛德畢斯綜合熱”。SINV在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、復(fù)制、翻譯及發(fā)病機理等方面均集中體現(xiàn)了動物病毒的特征，并且其為溫和型病原體，操作安全性高，，目前已作為模型病毒被廣泛應(yīng)用于動物病毒基本規(guī)律的研究。SINV在感染BHK、Vero等哺乳動物細胞的同時，也可以感染C6/36等昆蟲細胞，但該病毒在活體動物中的感染路徑和組織嗜性并不清楚，進一步探討其感染的分子機制有賴于可視化重組病毒的制備。腦內(nèi)接種SINV可致3日齡乳鼠死亡，而高日齡小鼠在接種SINV后可自愈。近期研究表明，經(jīng)過傳代培養(yǎng)或定點突變后的篩選病毒可使高日齡小鼠死亡。但是SINV神經(jīng)毒力株特異性的分子機理還有待于進一步研究。 XJ-160病毒是上世紀90年代從新疆采集的蚊蟲標本分離到的一株SIN病毒。本課題組多年來針對其開展了一系列工作，包括全基因組序列測定和分析，感染性克隆構(gòu)建等。為了進一步探討辛德畢斯病毒的組織嗜性，本研究以XJ-160病毒感染性克隆為分子基礎(chǔ)，通過融合PCR、體外轉(zhuǎn)錄和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等方法構(gòu)建新型增強型綠色熒光蛋白（Enchanced green fluorescent protein，EGFP）報告基因標記的SINV，并利用標記病毒進行了細胞易感性研究。同時，為了探討決定SINV神經(jīng)毒力日齡依賴性的分子機制，本研究還通過體外定點突變等方法對其E2基因上的關(guān)鍵毒力位點進行突變，并考察E2基因定點突變SINV的神經(jīng)毒力特征。 本研究利用XJ-160病毒反向遺傳學(xué)技術(shù)平臺，獲得了EGFP標記的SINV和4株突變病毒�；謴�(fù)病毒的空斑形態(tài)和增殖趨勢均與親本病毒相似。利用標記病毒進行細胞嗜性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SINV對腎癌細胞具有特異性侵染能力，為腎癌治療帶來了新的契機，對于開發(fā)相應(yīng)的腫瘤治療手段具有重要的指導(dǎo)意義。同時，乳鼠神經(jīng)毒力實驗結(jié)果提示，E2基因上關(guān)鍵位點突變改變了XJ-160病毒致小鼠死亡的日齡，SINV致小鼠死亡的分子機理和確切的結(jié)果還需進一步加以驗證。本研究制備的報告基因標記SINV具有可視化特征，可廣泛應(yīng)用于抗病毒藥物篩選、病毒在活體動物內(nèi)感染路徑觀察等研究。而E2基因定點突變病毒的構(gòu)建也為進一步闡明SINV致小鼠死亡的神經(jīng)毒力的分子機理奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：辛德畢斯病毒 報告基因 病毒標記 E2包膜蛋白 定點突變
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373;R3411
【目錄】：

• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集3-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-15
• 第一章 緒論15-19
• 1.1 引言15-16
• 1.2 我國辛德畢斯病毒的研究概況16
• 1.3 辛德畢斯病毒基因組結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特征16-17
• 1.4 研究目的與研究內(nèi)容17-19
• 第二章 報告基因標記的辛德畢斯病毒的制備及應(yīng)用19-47
• 2.1 引言19-20
• 2.2 材料20-21
• 2.2.1 菌株、質(zhì)粒及細胞20
• 2.2.2 試劑及工具酶20
• 2.2.3 主要試劑配制20-21
• 2.2.4 主要儀器設(shè)備21
• 2.3 實驗方法21-34
• 2.3.1 含 EGFP 報告基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建21-27
• 2.3.2 含 EGFP 報告基因重組質(zhì)粒的鑒定27-28
• 2.3.3 報告基因標記辛德畢斯活病毒的拯救28-30
• 2.3.4 報告基因標記拯救病毒的鑒定30
• 2.3.5 標記病毒遺傳穩(wěn)定性的檢測30-31
• 2.3.6 標記病毒的滴度測定31-32
• 2.3.7 標記病毒對各種細胞的感染性檢測32-34
• 2.4 結(jié)果34-43
• 2.4.1 報告基因標記 SINV 重組質(zhì)粒的構(gòu)建策略34-35
• 2.4.2 報告基因標記 SINV 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定35-38
• 2.4.3 報告基因標記 SINV 的制備38-40
• 2.4.4 重組 EGFP 標記病毒的穩(wěn)定性檢測40-41
• 2.4.5 重組標記病毒的滴定及空斑形態(tài)41-42
• 2.4.6 拯救病毒對各種細胞的感染性分析42-43
• 2.5 討論43-47
• 第三章 定點突變辛德畢斯病毒的制備與鑒定47-61
• 3.1 引言47
• 3.2 材料47-49
• 3.2.1 菌株、質(zhì)粒及細胞47-48
• 3.2.2 試劑及工具酶48
• 3.2.3 主要試劑配制48
• 3.2.4 主要儀器設(shè)備48-49
• 3.3 實驗方法49-55
• 3.3.1 E2 定點突變體的構(gòu)建與鑒定49-52
• 3.3.2 E2 定點突變病毒的獲得52-54
• 3.3.3 E2 定點突變病毒的鑒定54-55
• 3.3.4 乳鼠神經(jīng)毒力實驗55
• 3.4 結(jié)果55-60
• 3.5 討論60-61
• 第四章 結(jié)論與展望61-63
• 參考文獻63-73
• 致謝73-75
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文75-77
• 作者簡介77
• 導(dǎo)師簡介77-78
• 碩士研究生學(xué)位論文答辯委員會決議書78-79

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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2 周國林,梁國棟,李蕾,付士紅,李福勝,金奇,張海林,黃文麗,侯云德;我國分離的甲病毒YN87448毒株全部結(jié)構(gòu)區(qū)基因核苷酸的序列測定及分析[J];病毒學(xué)報;1999年03期

3 李蕾,梁國棟,周國林,李富勝,付士紅,何海懷,金奇,侯云德;我國首次分離的辛德畢斯病毒(XJ-160病毒株)全基因組核苷酸序列測定[J];病毒學(xué)報;2000年02期

4 楊益良,梁國棟,付士紅,何海懷,李曉宇,鄧娟,蘇乃倫,王力華,侯云德;中國首次分離的辛德畢斯病毒XJ-160病毒株感染性全基因組cDNA克隆的構(gòu)建與分析[J];病毒學(xué)報;2005年03期

5 王力華;付士紅;唐青;楊益良;梁國棟;;三重融合PCR法構(gòu)建感染性辛德畢斯嵌合病毒cDNA克隆[J];病毒學(xué)報;2006年02期

6 梁國棟;;蟲媒病毒甲病毒分子生物學(xué)研究進展[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;1996年01期

7 周國林,梁國棟,李蕾,付士紅,李福勝,金奇,張海林,黃文麗,侯云德;中國分離的甲屬病毒YN87448毒株非結(jié)構(gòu)區(qū)基因的核苷酸序列測定及分析[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;1999年04期

8 周國林,梁國棟,李蕾,付士紅,金奇,張海林,黃文麗,侯云德;我國分離的甲病毒YN87448株基因組序列的初步分析[J];中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志;1998年01期

  本文關(guān)鍵詞：重組辛德畢斯病毒的制備及其功能特性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：354386