本文關(guān)鍵詞：Cdc25A抑制RIG-Ⅰ介導(dǎo)的信號(hào)通路機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：RIG-Ⅰ介導(dǎo)的天然免疫反應(yīng)是宿主抗病毒的重要防御機(jī)制。模式識(shí)別受體(PRR)RIG-1分布在細(xì)胞質(zhì)中,當(dāng)病毒感染宿主細(xì)胞之后,RIG-Ⅰ通過其C末端特異性地識(shí)別并結(jié)合病毒的病原相關(guān)分子模式(PAMP),主要是帶有5’-Ppp的RNA(包括ssRNA和dsRNA)和短的dsRNA,導(dǎo)致其自身發(fā)生ATP依賴的構(gòu)象改變,釋放出N端的CARDs結(jié)構(gòu)域�；罨腞IG-Ⅰ和定位于線粒體外膜上的VISA通過CARD結(jié)構(gòu)域之間的相互作用結(jié)合在一起,激活VISA,活化的VISA繼續(xù)招募下游的信號(hào)蛋白,如TRAF3/6、TRADD、TANK蛋白等,在線粒體上形成一個(gè)以VISA為中心的信號(hào)復(fù)合體,磷酸化激活TBK1和IKK,最終導(dǎo)致NF-κB和IRF3/7的活化入核并結(jié)合到IFNp基因的調(diào)節(jié)區(qū),調(diào)節(jié)IFNp的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。RIG-Ⅰ介導(dǎo)的信號(hào)通路在宿主的天然免疫反應(yīng)中的重要地位,要求宿主細(xì)胞必須能夠?qū)IG-Ⅰ信號(hào)通路進(jìn)行嚴(yán)密的調(diào)控,以免造成細(xì)胞自身的損傷。目前對(duì)RIG-Ⅰ信號(hào)通路調(diào)控的研究主要集中在2個(gè)方面：①宿主細(xì)胞蛋白對(duì)RIG-Ⅰ信號(hào)通路的調(diào)控,包括正調(diào)控和負(fù)調(diào)控。TRIM25蛋白是一種E3泛素連接酶,能夠特異的和RIG-Ⅰ的CARD區(qū)相互作用,介導(dǎo)RIG-Ⅰ的CARD區(qū)的Lys172發(fā)生Lys63連接的泛素化,促進(jìn)RIG-Ⅰ與VISA的結(jié)合,正調(diào)控RIG-Ⅰ信號(hào)通路。但另外一種E3泛素連接酶RNF125則能夠介導(dǎo)RIG-Ⅰ的N端部分發(fā)生Lys48連接的泛素化,導(dǎo)致RIG-Ⅰ的泛素化降解,負(fù)調(diào)節(jié)RIG-Ⅰ信號(hào)通路。此外,負(fù)調(diào)控RIG-Ⅰ信號(hào)通路的細(xì)胞蛋白還有DUBA、CYLD、SIKE、SHP1等。②病毒蛋白對(duì)RIG-Ⅰ信號(hào)通路的調(diào)控。如A型流感病毒編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白NSl,它可以特異性的結(jié)合RIG-Ⅰ,抑制其功能。丙型肝炎病毒HCV的NS3/4A具有蛋白酶活性,能夠特異的從Cys508位氨基酸殘基切斷VISA,使VISA從線粒體上脫離,從而失去信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。大量的研究表明,在RIG-Ⅰ信號(hào)通路的調(diào)控中,蛋白的磷酸化修飾發(fā)揮著非常重要的作用,例如我們實(shí)驗(yàn)室最近發(fā)現(xiàn)的蛋白激酶CKlyl通過磷酸化p65的Ser536,使其發(fā)生CUL2和COMMD1介導(dǎo)的泛素化降解,從而抑制RIG-Ⅰ信號(hào)通路；IKK復(fù)合體磷酸化IKB,使IκB發(fā)生泛素化降解,活化NF-κB入核,啟動(dòng)IFNp基因轉(zhuǎn)錄；活化的TBKl磷酸化轉(zhuǎn)錄因子IRF3/7,形成IRF3/7同源或異源二聚體,入核,促進(jìn)IFNβ基因轉(zhuǎn)錄。但是,目前關(guān)于RIG-Ⅰ信號(hào)通路蛋白去磷酸化調(diào)控的研究還不是很深入。通過前期的熒光素酶報(bào)告基因篩選,我們發(fā)現(xiàn)磷酸酶Cdc25A能抑制RIG-Ⅰ信號(hào)通路。Cdc25A是一個(gè)雙特異性的磷酸酶。已有的研究表明,Cdc25A與細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞增殖、腫瘤發(fā)生和預(yù)后不良等密切相關(guān),但Cdc25A對(duì)天然免疫調(diào)控的研究目前還沒有文獻(xiàn)報(bào)道。我們的研究表明,過表達(dá)Cdc25A顯著的抑制了仙臺(tái)病毒SeV和A型流感病毒RNA誘導(dǎo)的IFNp啟動(dòng)子的激活。熒光素酶報(bào)告基因分析發(fā)現(xiàn)Cdc25A能夠抑制RIG-Ⅰ、VISA和TBK1等蛋白誘導(dǎo)的IFNβ啟動(dòng)子的激活,但卻不影響IRF3誘導(dǎo)的ISRE啟動(dòng)子的激活和p65誘導(dǎo)的NF-κB啟動(dòng)子的激活,這也就暗示Cdc25A可能是作用于TBK1水平負(fù)調(diào)控RIG-Ⅰ信號(hào)通路,進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),Cdc25A能夠抑制TBKl和IRF3的磷酸化,表明Cdc25A對(duì)RIG-Ⅰ信號(hào)通路的調(diào)控可能與其磷酸酶活性有關(guān)。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明Cdc25A可以結(jié)合RIG-Ⅰ、VISA和TRAF6,并且Cdc25A能夠抑制VISA和TBK1、MITA等蛋白的相互作用,因此我們推測(cè),Cdc25A可能是通過與RIG-Ⅰ信號(hào)通路的蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合,進(jìn)而影響了VISA信號(hào)復(fù)合體的組裝,抑制RIG-Ⅰ信號(hào)通路。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn),Cdc25A與RIG-Ⅰ N端CARDs結(jié)構(gòu)域的結(jié)合能力明顯強(qiáng)于全長(zhǎng)的RIG-Ⅰ,這提示我們,Cdc25A可能是通過競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合CARDs結(jié)構(gòu)域,抑制了RIG-Ⅰ、VISA等蛋白形成信號(hào)復(fù)合體。綜上,我們提出了Cdc25A負(fù)調(diào)控RIG-Ⅰ信號(hào)通路可能的分子機(jī)制：Cdc25A可能通過競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合RIG-Ⅰ和VISA蛋白的CARDs結(jié)構(gòu)域,干擾VISA信號(hào)復(fù)合體的組裝,進(jìn)而抑制TBK1的磷酸化,負(fù)調(diào)控RIG-Ⅰ信號(hào)通路,同時(shí),Cdc25A的磷酸酶活性也可能直接作用于TBK1,抑制TBK1的磷酸化,下調(diào)RIG-Ⅰ信號(hào)通路。
【關(guān)鍵詞】：天然免疫 RIG-Ⅰ信號(hào)通路 VISA信號(hào)復(fù)合體 Cdc25A 去磷酸化
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 研究進(jìn)展10-26
• 第一節(jié) RLR信號(hào)通路概述10-18
• 1.1 天然免疫簡(jiǎn)介10
• 1.2 Ⅰ型干擾素系統(tǒng)10-11
• 1.3 RLRs的鑒定及其功能11-12
• 1.4 RIG-Ⅰ識(shí)別RNA的分子基礎(chǔ)12-13
• 1.5 RLR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)13-15
• 1.6 宿主細(xì)胞蛋白對(duì)RLR信號(hào)通路的調(diào)節(jié)15-16
• 1.7 病毒蛋白與RLRs之間的相互作用16-18
• 第二節(jié) Cdc25A概述18-25
• 2.1 Cdc25A簡(jiǎn)介18
• 2.2 Cdc25A調(diào)控細(xì)胞周期18-23
• 2.2.1 Cdc25A對(duì)G1/S進(jìn)程的調(diào)節(jié)18-22
• 2.2.2 Cdc25A對(duì)G2/M進(jìn)程的調(diào)節(jié)22-23
• 2.3 Cdc25A對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控23-24
• 2.4 Cdc25A的過表達(dá)與腫瘤發(fā)生24-25
• 第三節(jié) 本文研究的內(nèi)容和意義25-26
• 第二章 材料與方法26-36
• 第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 1.1 細(xì)胞株、菌種、病毒26
• 1.2 質(zhì)粒26
• 1.3 抗體26-27
• 1.4 其他實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 1.5 儀器設(shè)備28
• 第二節(jié) 研究方法28-36
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)28
• 2.2 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞Top10的制備28-29
• 2.3 PEI轉(zhuǎn)染細(xì)胞29
• 2.4 Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染細(xì)胞29-30
• 2.5 flu RNA的制備30
• 2.6 RNA的提取30-31
• 2.7 SeV病毒的感染31
• 2.8 報(bào)告基因分析31-32
• 2.9 SDS-PAGE分析32-33
• 2.10 免疫印跡分析(Western blot分析)33-34
• 2.11 蛋白免疫共沉淀(Co-IP)34
• 2.12 免疫熒光染色34-36
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-46
• 第一節(jié) Cdc25A能夠下調(diào)RIG-Ⅰ信號(hào)通路介導(dǎo)的IFNβ的表達(dá)36-37
• 第二節(jié) 病毒感染不影響細(xì)胞內(nèi)Cdc25A蛋白水平37
• 第三節(jié) Cdc25A抑制TBK1和IRF3的磷酸化37-38
• 3.1 Cdc25A能夠抑制外源的TBK1和IRF3的磷酸化37-38
• 3.2 Cdc25A能夠抑制內(nèi)源的TBK1和IRF3的磷酸化38
• 第四節(jié) Cdc25A可能是在TBK1水平抑制RIG-Ⅰ信號(hào)通路38-41
• 第五節(jié) SeV感染增加Cdc25A與TBK1的共定位41
• 第六節(jié) Cdc25A與RIG-Ⅰ信號(hào)通路的蛋白存在相互作用41-43
• 第七節(jié) Cdc25A抑制VISA信號(hào)復(fù)合體的形成43-45
• 第八節(jié) Cdc25A與RIG-Ⅰ CARD區(qū)的結(jié)合能力比RIG-Ⅰ強(qiáng)45-46
• 第四章 分析討論46-49
• 第五章 總結(jié)與展望49-51
• 第一節(jié) 總結(jié)49
• 第二節(jié) 展望49-51
• 參考文獻(xiàn)51-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄63

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2 解文博;葉玲;;p38絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路的部分研究方法[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2009年10期

3 黎增輝;廖愛軍;;JNK信號(hào)通路[J];國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志;2010年03期

4 李林;;Wnt信號(hào)通路及其與骨形成的關(guān)系[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2010年20期

5 李鳳賀;辛世杰;楊棟;惠林萍;楊昱;張健;段志泉;;SHH信號(hào)通路在血小板源性生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用研究[J];中國(guó)血管外科雜志(電子版);2010年04期

6 陳建勇;王聰;王娟;曹禮榮;;MAPK信號(hào)通路研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥科學(xué);2011年08期

7 李寶新;李玉坤;;Wnt信號(hào)通路對(duì)骨調(diào)節(jié)研究新進(jìn)展[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2008年03期

8 李佳殷;林麗珠;;JNK信號(hào)通路在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J];實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2012年18期

9 張玉婷;劉立新;;胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白在相關(guān)信號(hào)通路中的作用研究進(jìn)展[J];中華消化病與影像雜志(電子版);2012年05期

10 席曉慧;王福文;牟艷玲;;Wnt信號(hào)通路與心血管疾病的研究進(jìn)展[J];食品與藥品;2014年01期

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2 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑[A];第一屆全國(guó)麻醉藥理專業(yè)委員會(huì)第二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

3 蔣瑩;程華;張麗;艾厚喜;王文;;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路抑制劑[A];中國(guó)成人醫(yī)藥教育論壇（4）[C];2011年

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5 記者 劉海英;一種蛋白決定人的抗壓能力[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

6 通訊員 喬蕤琳 記者 衣曉峰 聶松義;癌癥中小分子和微小核苷酸有關(guān)聯(lián)[N];健康報(bào);2012年

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1 王森;乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2和TLR4信號(hào)通路的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 尚果果;NRF2抗氧化應(yīng)激信號(hào)通路的活化在糖尿病腎病中的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

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6 成旭東;黃芪活性物質(zhì)篩選及基于PKC-ERK信號(hào)通路抑制肺癌的作用機(jī)理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

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8 趙睿;Wnt信號(hào)通路在臂叢神經(jīng)根性撕脫傷誘發(fā)的神經(jīng)病理性痛中的作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：351193