本文關(guān)鍵詞：NF-κB在海馬神經(jīng)元癲癇模型中的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的： 1、顳葉癲癇是一種難治性癲癇,是神經(jīng)科常見的臨床綜合征,其發(fā)病機制尚未完全闡明。目前NF-κB在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用是神經(jīng)病學(xué)研究的熱點之一,研究發(fā)現(xiàn)NF-κB通過介導(dǎo)免疫損傷,可造成腦損害； 2、探討體外海馬神經(jīng)元癲癇的發(fā)病機制； 3、探討無鎂細胞外液誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元放電后NF-κB的表達及活性的研究,并進一步驗證體內(nèi)大鼠癲癇模型中NF-κB表達結(jié)果的可信度,從而為臨床抗癲癇藥物提供一定的理論基礎(chǔ)。 實驗方法： 以體外原代培養(yǎng)的Sprague Dawley乳鼠(出生24小時之內(nèi))大腦海馬神經(jīng)元作為實驗材料,體外培養(yǎng)7天后,進行實驗。 1、細胞形態(tài)學(xué)觀察：于倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài),并采集各組細胞形態(tài)的圖像。 2、免疫熒光染色法(MAP2)對體外培養(yǎng)的神經(jīng)元進行純度鑒定：用MAP2抗體標記神經(jīng)元,DAPI染核,在熒光顯微鏡下觀察,并采集圖像。 3、利用膜片鉗技術(shù)檢測神經(jīng)元癇樣放電。 4、Western blot方法檢測正常對照組和實驗組NF-κB的表達水平。 5、免疫熒光染色法對實驗組和對照組細胞內(nèi)NF-κB的表達水平和亞細胞定位進行檢測。 實驗結(jié)果： 1、細胞形態(tài)學(xué)觀察及神經(jīng)元純度鑒定： 正常神經(jīng)元經(jīng)體外培養(yǎng)48小時后大多數(shù)呈紡錘形,部分呈橢圓形或三角形,細胞突起可見,培養(yǎng)第7天時胞體立體感好,形態(tài)飽滿,突起更豐富,相互交織成網(wǎng)絡(luò)。采用神經(jīng)元特異性抗體微管相關(guān)蛋白2(MAP2)進行免疫熒光染色(詳見實驗方法2),熒光倒置顯微鏡采集熒光信號,鑒定結(jié)果顯示：培養(yǎng)第2天的神經(jīng)元陽性率為50%～60%(圖1),而培養(yǎng)第7天所得神經(jīng)元陽性率達95%(圖2)。無鎂細胞外液處理的海馬神經(jīng)元生長狀態(tài)良好,部分神經(jīng)元胞體相互聚集,交織成神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。 2、膜片鉗檢測結(jié)果顯示： 以正常組細胞作為對照組,在正常細胞外液中,電流鉗記錄到正常神經(jīng)元偶然會有動作電位的發(fā)放,該動作電位的幅度范圍為60～70mV。而經(jīng)無鎂細胞外液處理3h后再恢復(fù)到正常細胞外液的條件下,出現(xiàn)神經(jīng)元持續(xù)強直高頻爆發(fā)的“癲癇樣”自發(fā)性放電,其電壓幅度為60～80mV,頻率大幅度提高。 3、Western blot印跡法顯示： Western blot結(jié)果顯示無鎂處理海馬神經(jīng)元組(實驗組)與正常對照組NF-κB蛋白表達相對灰度值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 4、免疫熒光方法檢測細胞定位及表達水平 正常對照組海馬神經(jīng)元NF-κB主要在胞漿表達,無鎂處理實驗組海馬神經(jīng)元NF-κB在胞核表達為主,提示神經(jīng)元被活化,與western blot結(jié)果相一致。 實驗結(jié)論： 1、在原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中,無鎂細胞外液可誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元產(chǎn)生穩(wěn)定的、持續(xù)的體外神經(jīng)元癲癇持續(xù)狀態(tài)模型。該模型具有實驗條件恒定、易控制、實驗周期短的優(yōu)點,所以是生理、藥理、病理等研究領(lǐng)域的重要方法之一。 2、在原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中, Western blot實驗結(jié)果顯示：實驗組(無鎂處理組)NF-κB蛋白表達比正常對照組增加,差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。 3、在原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中,免疫熒光結(jié)果顯示：正常對照組NF-κB蛋白主要在海馬神經(jīng)元胞漿表達,而實驗組(無鎂處理組)NF-κB蛋白主要在神經(jīng)元胞核表達,提示神經(jīng)元被活化,NF-κB發(fā)生核移位。 4、結(jié)合上述結(jié)果,提示NF-κB可能是參與癲癇活動的重要機制之一。
【關(guān)鍵詞】：體外培養(yǎng) 神經(jīng)元 癲癇 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R742.1;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 符號說明9-10
• 前言10-13
• 研究現(xiàn)狀、成果10-11
• 研究目的、方法11-13
• 對象和方法13-22
• 實驗動物13
• 主要儀器設(shè)備13
• 主要試劑及耗材13-15
• 主要溶液及配方15-17
• 實驗方法17-22
• 統(tǒng)計學(xué)處理22
• 結(jié)果22-27
• 乳鼠海馬神經(jīng)元純度鑒定22-23
• 形態(tài)學(xué)觀察23-24
• 膜片鉗檢測神經(jīng)元癇樣放電24
• Western blotting法檢測蛋白表達水平24-26
• 免疫熒光染色法檢測表達水平和亞細胞定位26-27
• 討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-36
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明36-37
• 綜述 NF-κB特點及與癲癇關(guān)系的研究進展37-52
• 綜述參考文獻46-52
• 致謝52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 劉月影,袁寶強;嚴重驚厥發(fā)作過程中核因子-κB活化與神經(jīng)元凋亡的關(guān)系[J];中國當代兒科雜志;2005年03期

2 孫玉明;吳飛翔;繆雪蓉;呂欣;徐學(xué)武;楊立群;吳鏡湘;俞衛(wèi)鋒;;坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠脊髓組織Toll樣受體4及下游細胞因子表達的變化[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年08期

3 張?zhí)N增;;癲癇的外科治療[J];家庭醫(yī)學(xué);2007年12期

4 張瑞華;王玉平;孟繁花;杜會山;;癲癇的治療研究現(xiàn)狀[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2008年04期

5 郭偉;王奇;陳云波;;細胞核因子κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑內(nèi)的活化與調(diào)節(jié)機制研究進展[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2006年11期

6 劉曉;邢麗娜;;核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB與腫瘤[J];實用腫瘤學(xué)雜志;2007年02期

7 黃亞玲;孫丹;劉亞黎;;戊四氮反復(fù)點燃致不同發(fā)育期大鼠海馬損傷的病理改變[J];中華兒科雜志;2005年12期

  本文關(guān)鍵詞：NF-κB在海馬神經(jīng)元癲癇模型中的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：351082