本文關(guān)鍵詞：shR-377聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞定向分化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：（1）建立體外分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(HADMSCs)的方法。（2）探索shR-377聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)HADMSCs向神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）定向分化。 方法：（1）采用吸脂術(shù)獲取健康青年人腹部大網(wǎng)膜脂肪組織，膠原酶消化法分離HADMSCs，用含有2ng/ml FGF-b和5%FBS的DMEMF12（1:1）培養(yǎng)基體外持續(xù)傳代培養(yǎng)，并觀察有無分化，對(duì)第三代HADMSCs進(jìn)行表型鑒定。（2）取第三代HADMSCs，用shR-377轉(zhuǎn)染2次，，第一次轉(zhuǎn)染后加入含有FGF-b、BMP4、B27、activinA的DMEMF12（1:1）培養(yǎng)基，第二次轉(zhuǎn)染后加入含有IGF-1、EGF、SCF、FGF-b因子的DMEMF12（1:1）培養(yǎng)基。每日觀察細(xì)胞形態(tài)變化。（3）取誘導(dǎo)后第1日的細(xì)胞用流式細(xì)胞儀檢測(cè)NSCs標(biāo)志物神經(jīng)巢蛋白(nestin)表達(dá)率，取誘導(dǎo)后第3日的細(xì)胞進(jìn)行RT-qPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定nestin和神經(jīng)特異性RNA結(jié)合蛋白musashi，并對(duì)轉(zhuǎn)化后細(xì)胞的分化能力進(jìn)行分析。 結(jié)果：（1）從形態(tài)學(xué)觀察HADMSCs體外連續(xù)培養(yǎng)20代未見明顯分化。（2）誘導(dǎo)后第1日細(xì)胞形態(tài)明顯發(fā)生變化，大部分細(xì)胞偽足收縮變細(xì)呈單極或多極延長(zhǎng)，細(xì)胞核膨脹隆起，類似蝌蚪形。第3日約一半細(xì)胞聚集形成神經(jīng)干樣細(xì)胞球，第7日絕大部分細(xì)胞聚集成神經(jīng)干樣細(xì)胞球。（3）誘導(dǎo)后第1日的細(xì)胞用流式細(xì)胞儀測(cè)定nestin表達(dá)率為（64.6±3.2%），誘導(dǎo)后第3日神經(jīng)干樣細(xì)胞球RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示nestin、musashi表達(dá)陽性，免疫細(xì)胞化學(xué)染色見nestin表達(dá)陽性。神經(jīng)干樣細(xì)胞球進(jìn)一步分化培養(yǎng)，可見到很明顯的細(xì)長(zhǎng)突觸，雙極或多極神經(jīng)元樣形態(tài)，進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)顯示GFAP、NSE、核受體相關(guān)因子1(NURR1)表達(dá)陽性，免疫細(xì)胞化學(xué)染色見NSE、GFAP表達(dá)陽性。 結(jié)論：(1)采用膠原酶消化和含2ng/ml FGF-b、5%FBS的DMEMF12（1:1）培養(yǎng)基成功建立體外分離培養(yǎng)HADMSCs方法。(2)shR-377聯(lián)合細(xì)胞因子的誘導(dǎo)方法可以使HADMSCs定向分化為NSCs，誘導(dǎo)時(shí)間為48h，轉(zhuǎn)化率為（64.6±3.2%）。轉(zhuǎn)化時(shí)間和轉(zhuǎn)化率比傳統(tǒng)方法有較大提高，為體外大量獲得NSCs提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：shR-377 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo) 神經(jīng)干細(xì)胞 定向分化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英縮略詞表8-9
• 第1章 前言9-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器12-13
• 2.2 試劑13-14
• 2.3 HADMSCs 分離培養(yǎng)及鑒定14-16
• 2.3.1 HADMSCs 的分離培養(yǎng)14
• 2.3.2 HADMSCs 的傳代培養(yǎng)14
• 2.3.3 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇14-15
• 2.3.4 HADMSCs 形態(tài)學(xué)觀察15
• 2.3.5 HADMSCs 的表型鑒定15-16
• 2.4 shR-377 聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo) HADMSCs 向 NSCs 定向分化16-17
• 2.4.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染16
• 2.4.2 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)16-17
• 2.5 誘導(dǎo)后 NSCs 的鑒定與分化17-22
• 2.5.1 流式細(xì)胞檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞 nestin 及轉(zhuǎn)化率17-18
• 2.5.2 RT-qPCR 檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞 nestin 和 musashi18-21
• 2.5.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞 nestin21
• 2.5.4 誘導(dǎo)后 NSCs 分化培養(yǎng)及分化后神經(jīng)細(xì)胞的鑒定21-22
• 2.6 統(tǒng)計(jì)方法22-23
• 第3章 結(jié)果23-33
• 3.1 HADMSCs 的分離培養(yǎng)與鑒定23-25
• 3.1.1 HADMSCs 形態(tài)學(xué)特征23-24
• 3.1.2 HADMSCs 的表型鑒定24-25
• 3.2 shR-377 聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo) HADMSCs 向 NSCs 定向分化25-27
• 3.2.1 shR-377 轉(zhuǎn)染 HADMSCs 的轉(zhuǎn)染效果25-26
• 3.2.2 HADMSCs 向 NSCs 定向分化的形態(tài)變化26-27
• 3.3 誘導(dǎo)后 NSCs 的鑒定與分化27-33
• 3.3.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞 nestin 及轉(zhuǎn)化率27-28
• 3.3.2 RT-qPCR 檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞 nestin 和 musashi28-29
• 3.3.3 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞 nestin29-30
• 3.3.4 誘導(dǎo)后 NSCs 進(jìn)一步向神經(jīng)細(xì)胞分化形態(tài)觀察30
• 3.3.5 RT-qPCR 檢測(cè)分化后神經(jīng)細(xì)胞 NSE、GFAP 和 NURR130-32
• 3.3.6 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)分化后神經(jīng)細(xì)胞 NSE 和 GFAP32-33
• 第4章 討論33-36
• 第5章 結(jié)論36-37
• 致謝37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)46-49

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