本文關(guān)鍵詞：miR-148a在HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞增殖中的作用及其可能機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討miR-148a是否可以通過靶向PTEN減少對PI3K/Akt信號通路的抑制，從而介導(dǎo)HMGB1引起的小鼠系膜細胞的增殖。 方法： 1以小鼠系膜細胞MMC為研究對象，隨機分為1. normal group；2.HMGB1group;3. miR-148a mimic+HMGB1group;4. pre-miR+HMGB1group;5. miR-148a inhibitor+HMGB1group;6. anti-miR+HMGB1group，以western blot技術(shù)檢測PTEN、p-Akt-S473、Akt、PCNA、Cyclin D1、CDK4和p16蛋白的表達水平；免疫細胞化學(xué)技術(shù)檢測PCNA蛋白表達；BrdU摻入及免疫熒光技術(shù)檢測BrdU的表達情況。 2將常規(guī)培養(yǎng)的小鼠系膜細胞MMC隨機分為1. normal group；2.HMGB1group;3. miR-148a mimic+HMGB1group;4. PTEN-WT+HMGB1group;5. miR-148a mimic+PTEN-WT+HMGB1group;6. NC+pre-miR+HMGB1group，以western blot技術(shù)檢測PCNA蛋白的表達。 結(jié)果： 1miR-148a mimic下調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中PTEN蛋白的表達，而miR-148a inhibitor上調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中PTEN蛋白的表達 Western blot結(jié)果顯示：與HMGB1刺激組相比， miR-148amimic+HMGB1轉(zhuǎn)染組PTEN蛋白水平明顯降低（0.35±0.028），而miR-148a inhibitor+HMGB1轉(zhuǎn)染組中PTEN蛋白水平明顯升高（1.06±0.045）差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。HMGB1刺激組和pre-miR+HMGB1刺激組相比，PTEN蛋白表達無顯著性差異，但均低于正常對照組（P0.05）。（Fig.1、2， Table1） 2miR-148a mimic上調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中p-Akt-S473蛋白的表達，而miR-148a inhibitor則下調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中p-Akt-S473蛋白的表達 HMGB1刺激小鼠系膜細胞20min后，western blot結(jié)果顯示：miR-148amimic+HMGB1轉(zhuǎn)染組p-Akt-S473蛋白水平明顯升高（1.085±0.067），與HMGB1刺激組相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），HMGB1刺激組和pre-miR+HMGB1刺激組相比，p-Akt-S473表達無顯著性差異，但均高于正常對照組（P0.05）。（Fig.3， Table2）轉(zhuǎn)染miR-148ainhibitor+HMGB1刺激組中p-Akt-S473蛋白水平明顯降低（0.467±0.013），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），（Fig.4，Table2）而各組之間總Akt無明顯差異。 3miR-148a mimic上調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞的增殖水平 與正常對照組相比，HMGB1刺激組中BrdU和PCNA蛋白表達明顯上調(diào)，miR-148a mimic+HMGB1轉(zhuǎn)染組中PCNA蛋白表達顯著高于HMGB1刺激組，BrdU的陽性表達率也顯著升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。HMGB1刺激組和pre-miR+HMGB1刺激組相比，，PCNA和BrdU陽性表達率無明顯差異。（Fig.5，F(xiàn)ig.6） Western blot結(jié)果顯示：與HMGB1刺激組相比， miR-148amimic+HMGB1轉(zhuǎn)染組PCNA蛋白表達明顯升高（1.04±0.045），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），而HMGB1刺激組和pre-miR+HMGB1刺激組相比，PCNA蛋白表達無顯著性差異。（Fig.7，Table3） 4miR-148a inhibitor下調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中PCNA蛋白的表達 Western blot結(jié)果顯示：與HMGB1刺激組相比， miR-148ainhibitor+HMGB1轉(zhuǎn)染組PCNA的蛋白水平明顯降低（0.50±0.035），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。而HMGB1刺激組和anti-miR+HMGB1刺激組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但均高于正常對照組（P0.05）。（Fig.8，Table3） 5miR-148a mimic上調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中Cyclin D1和CDK4蛋白的表達水平，而miR-148a inhibitor則下調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中Cyclin D1、CDK4蛋白的表達 Western blot結(jié)果顯示：miR-148a mimic+HMGB1轉(zhuǎn)染組與HMGB1刺激組相比，Cyclin D1和CDK4蛋白水平明顯升高（1.08±0.024,0.89±0.025），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）（Fig.7，Table3）；而miR-148ainhibitor+HMGB1轉(zhuǎn)染組與HMGB1刺激組相比，Cyclin D1和CDK4蛋白水平明顯降低（0.19±0.016，0.48±0.013），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（Fig.8，Table3） 6miR-148a mimic下調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞中p16蛋白的表達，而miR-148a inhibitor上調(diào)小鼠系膜細胞中p16蛋白的表達 HMGB1刺激MMC8h后， Western blot結(jié)果顯示： miR-148amimic+HMGB1轉(zhuǎn)染組與HMGB1刺激組相比，p16蛋白水平明顯降低（0.32±0.019），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）（Fig.7，Table3）。而miR-148a inhibitor上調(diào)HMGB1誘導(dǎo)的p16蛋白表達（0.84±0.02），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（Fig.8，Table3） 7同時轉(zhuǎn)染miR-148a mimic和PTEN-WT質(zhì)�？梢韵抡{(diào)HMGB1誘導(dǎo)的PCNA蛋白表達 Western blot結(jié)果顯示：與HMGB1刺激組相比，PTEN-WT質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，PCNA蛋白表達水平明顯降低（0.22±0.02），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；而同時轉(zhuǎn)染PTEN-WT質(zhì)粒和miR-148a mimic后，給與HMGB1刺激，系膜細胞中PCNA蛋白的表達水平較PTEN-WT轉(zhuǎn)染組顯著升高（0.64±0.02），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（Fig.9，Table4） 結(jié)論： miR-148a可能通過靶向PTEN，降低PTEN蛋白的表達，減弱對PI3K/AKT通路的抑制作用，促進Akt-S473位點磷酸化，通過上調(diào)CyclinD1/CDK4，下調(diào)p16，促進系膜細胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：狼瘡性腎炎 HMGB1 miR-148a PTEN PI3K/Akt 細胞增殖
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 結(jié)果21-24
• 附圖24-33
• 附表33-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-42
• 綜述 microRNA 與系統(tǒng)性紅斑狼瘡42-50
• 參考文獻46-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51-52

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁雪藝;周剛;;微核糖核酸在自身免疫性疾病和口腔癌前病變中作用的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2013年03期

2 Yajuan Li;Xiangdong Fang;Quan-Zhen Li;;Biomarker Profiling for Lupus Nephritis[J];Genomics, Proteomics & Bioinformatics;2013年03期

3 袁泉;柳滿然;曾宗躍;周旭春;;microRNA與胃癌耐藥的關(guān)系[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2013年17期

4 孫衍昶;郭t$t$;賽克;王翦;王潔;陳芙蓉;張宗平;陳忠平;;MicroRNA-181b提高U87細胞對VM-26的敏感性研究[J];中國神經(jīng)腫瘤雜志;2013年02期

5 Patrick-Denis St-Coeur;Mohamed Touaibia;Miroslava Cuperlovic-Culf;Pier Jr Morin;;Leveraging Metabolomics to Assess the Next Generation of Temozolomide-based Therapeutic Approaches for Glioblastomas[J];Genomics, Proteomics & Bioinformatics;2013年04期

6 汪章勛;周權(quán);孟慧敏;張軍;黃勃;;金龜子綠僵菌MicroRNA在蟬蛻和蠶血淋巴誘導(dǎo)下的差異表達分析[J];安徽科技學(xué)院學(xué)報;2013年05期

7 楊先濤;張禎禎;詹學(xué);朱朝敏;;肺結(jié)核患兒外周血單個核細胞中microRNA表達的初步研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2013年19期

8 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

9 林松;范磊;邵增務(wù);;微RNA調(diào)控自噬研究進展[J];國際骨科學(xué)雜志;2013年05期

10 安麗娜;董斐斐;王國坤;單冬凱;荊清;;MicroRNA與動脈粥樣硬化[J];國際心血管病雜志;2013年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 梁文杰;杜惠蘭;方朝義;張鳳華;丁英鈞;;實驗診斷學(xué)與中醫(yī)學(xué)的相符性結(jié)合[A];第十一次中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2013年

2 李春竹;戚新明;任進;;miR-491-3p在MDR1介導(dǎo)的人肝癌多藥耐藥中的作用[A];2013年中國藥學(xué)大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

3 Ruiwen Fan;Shanshan Yang;Zhanquan Shi;Kaiyuan Ji;Xiaoyun Jia;Jianbo Yao;George W Smith;Changsheng Dong;;Identification of a novel miRNA important for melanogenesis in alpaca(Lama Pacos)[A];2013中國駝業(yè)進展[C];2013年

4 曾清華;周箐;康秀華;;血清microRNA的檢測及在肺癌診斷中應(yīng)用的進展[A];江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合呼吸疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

5 Zhengrong Li;Yi Cao;Zhigang Jie;Yi Liu;Yingliang Li;Junhe Li;Guoming Zhu;Zhengren Liu;Yi Tu;Gen Peng;;MiR-495 and miR-551a inhibit cell migration and invasion of SGC7901 human gastric cancer cell line via direct PRL-3 regulation[A];江西省第二屆胃腸外科學(xué)術(shù)會議暨江西省第十二次中西醫(yī)結(jié)合普通外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

6 姜敏;張偉;;Micro-RNA作為人類上皮組織惡性腫瘤診斷和預(yù)后生物標(biāo)記物的應(yīng)用價值[A];江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合呼吸疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 秦燕;張玲云;張德玖;;核糖體展示技術(shù)在非編碼核酸研究中的應(yīng)用[A];生命科學(xué)——專題：RNA研究的新技術(shù)和新方法（第26卷第3期）[C];2014年

8 張逸寅;顧康生;;彌漫大B細胞淋巴瘤預(yù)后分子標(biāo)志物研究進展[A];中國腫瘤內(nèi)科進展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

9 李文峰;鐘伯雄;蘇松坤;;蜜蜂級型分化機理[A];2014年全國蜂產(chǎn)品市場信息交流會暨中國（哈爾濱）蜂業(yè)博覽會論文集[C];2014年

10 宋毅;謝延風(fēng);張鈴鐺;馮清林;劉明冬;張鵬;范仕兵;杜江峰;;MiRNA在垂體泌乳素腺瘤中表達的初步研究[A];全國高血壓防治知識推廣培訓(xùn)班暨健康血壓中國行海南�？跁撐木C合刊[C];2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁斌;MiR-23b在大鼠肝再生終止階段的表達及作用機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 李春慶;miRNA對PAN腎病大鼠nephrin介導(dǎo)蛋白尿調(diào)控機制及雷公藤制劑的保護作用[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 李捷;紅斑狼瘡患者高遷移率族蛋白-1的表達及其對下游炎癥因子調(diào)節(jié)作用的研究[D];中南大學(xué);2009年

4 趙莎;MicroRNA-126對CD4~+T細胞DNA甲基化調(diào)控及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用[D];中南大學(xué);2010年

5 姚剛;丹酚酸B對腎小管上皮細胞轉(zhuǎn)分化防治作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

6 程文靜;高通量深度測序繪制系統(tǒng)性紅斑狼瘡CD4~+T細胞全基因組MicroRNAs表達譜[D];中南大學(xué);2012年

7 丁澍;MicroRNA-142-3p/5p對CD4~+T細胞活化的調(diào)控及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病中的作用[D];中南大學(xué);2012年

8 李懿莎;miR-145在硬皮病TGF-β/Smad3促纖維化通路中的作用及機制研究[D];中南大學(xué);2012年

9 賈蓓;A型血友病人非整合誘導(dǎo)多能干細胞建系及其細胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

10 李曉妮;miR-23a～24-2～27a簇促進乳腺癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移機制的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林瓊;2型糖尿病腎病大鼠模型的建立及慢病毒載體介導(dǎo)siRNA對Ⅰ型膠原抑制作用的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 陳士偉;循環(huán)miR-189對系統(tǒng)性紅斑狼瘡的臨床診斷價值和意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 陳大鵬;miR-34通過PDGFR-β調(diào)控系膜細胞增殖的機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 牟志向;預(yù)測mmu-miR-30α調(diào)控糖皮質(zhì)激素受體及二者在小鼠足細胞上的表達[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

5 吳微;急慢性炎癥性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病microRNA基因譜的初步研究[D];中南大學(xué);2010年

6 王宇;系統(tǒng)性紅斑狼瘡CD4+T細胞microRNA表達譜研究[D];中南大學(xué);2010年

7 李海燕;腎病綜合征患者特定血清miRNA的差異性表達[D];廣西師范大學(xué);2012年

8 謝鳳燕;丹酚酸B阻止TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細胞轉(zhuǎn)分化以及相關(guān)microRNA的變化[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

9 臧加成;人椎間盤退變差異性表達microRNA的篩選及驗證研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

10 崔龍;胃液微小RNA的分析及其在胃癌篩查中的意義[D];寧波大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：miR-148a在HMGB1誘導(dǎo)的小鼠系膜細胞增殖中的作用及其可能機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：349160