胎兒器官成熟特別是肺成熟與分娩發(fā)動(dòng)是一個(gè)協(xié)同進(jìn)行的過程,而這一過程依賴于妊娠晚期內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素的增加。由于人類胎兒腎上腺的特殊結(jié)構(gòu)和胎盤糖皮質(zhì)激素屏障的存在,妊娠晚期胎兒組織11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅰ型（11β-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1,11β-HSD1）對17-羥-11-脫氫皮質(zhì)酮的活化作用可能成為胎兒體內(nèi)糖皮質(zhì)激素的重要來源。目前已有充分證據(jù)表明,大多數(shù)動(dòng)物胎兒肺能夠表達(dá)11β-HSD1,而且11β-HSD1-/-小鼠肺成熟出現(xiàn)障礙,提不11β-HSD1在胎兒肺成熟中的關(guān)鍵作用,但人胎兒組織特別是肺是否表達(dá)11β-HSD1目前還不明了。以往研究發(fā)現(xiàn),人胎膜表達(dá)的11β-HSD1也為胎兒器官成熟提供重要的糖皮質(zhì)激素來源,糖皮質(zhì)激素和促炎性細(xì)胞因子作為抑炎和促炎的兩種因子卻都可以誘導(dǎo)胎膜11β-HSD1的表達(dá),但其分子機(jī)制目前尚未闡明。本課題采用免疫組織化學(xué)、常規(guī)PCR、Western blotting、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、酶活性測定、啟動(dòng)子克隆與活性測定、功能蛋白過表達(dá)、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）和凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA）等技術(shù),首... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖0-1糖皮質(zhì)激素代謝酶llp一HsD作用示意圖(引自AnthonyE.Michaeletal，ReProduction;2003:126，425.441)

1A26o=40.0林g/m!確定RNA的濃度，根據(jù)OD260/OD280比值判斷RNA的純度，OD260/OD280比值 1.8~2.0視為純度高。同時(shí)進(jìn)行凝膠電泳觀察RNA是否降解(圖1一1)。HFL一 1LungLiver 285rRNA18SfRNA圖1一1瓊脂糖凝膠檢測人胎兒肺、肝組織和HFL一l細(xì)胞中提取的RNA是否降解;Fig.l一 1GelPictoresh()wedthequalityofRNAextraetedfromhumanfetal tissues(lungandliver)andhumanfetallungfibroblast(HFL一l). d)mRNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(反應(yīng)體系30川):1.按測定RNA濃度計(jì)算后取1林g總RNA和1.5川oligodT(12一18)分別加入同一 0.5ml離心管中，并用nEPC水補(bǔ)足至總體積14林l;11.將離心管放入PCR儀中，按65℃ 5min和4℃15秒程序反應(yīng);111.暫停逆轉(zhuǎn)錄j泛應(yīng)，各管加入混合液 17.5林 l(5XBuffer6林l， ZmMdNTp7.5林l)，42oC反應(yīng) 2min;iv.加入逆轉(zhuǎn)錄酶1閃，依次按以下條件反應(yīng):42℃ 45min，70℃10 min

3.2人胎兒肺組織與胎肺成纖維細(xì)胞(HFL一 1)1lp一HSDI蛋白的表達(dá)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，妊娠期8個(gè)月胎兒肺小支氣管和細(xì)支氣管上皮細(xì)胞(圖1一4A、B、C)、小支氣管間質(zhì)組織成纖維細(xì)胞(圖1一4A、C)都有11p一HSDI蛋白表達(dá)，肺泡囊(圖1一4D)和靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(圖1一4E)也表達(dá)11p一HSDI蛋白，而軟骨組織則無11p一HsDI蛋白表達(dá)(圖1一4A、B)。免疫組織化學(xué)染色陰性對照和妊娠期4個(gè)月胎兒肺組織中未能檢測到明顯的陽性染色(圖l一4F、G)。


本文編號：3491882