胎兒器官成熟特別是肺成熟與分娩發(fā)動是一個協(xié)同進行的過程,而這一過程依賴于妊娠晚期內(nèi)源性糖皮質激素的增加。由于人類胎兒腎上腺的特殊結構和胎盤糖皮質激素屏障的存在,妊娠晚期胎兒組織11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅰ型（11β-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1,11β-HSD1）對17-羥-11-脫氫皮質酮的活化作用可能成為胎兒體內(nèi)糖皮質激素的重要來源。目前已有充分證據(jù)表明,大多數(shù)動物胎兒肺能夠表達11β-HSD1,而且11β-HSD1-/-小鼠肺成熟出現(xiàn)障礙,提不11β-HSD1在胎兒肺成熟中的關鍵作用,但人胎兒組織特別是肺是否表達11β-HSD1目前還不明了。以往研究發(fā)現(xiàn),人胎膜表達的11β-HSD1也為胎兒器官成熟提供重要的糖皮質激素來源,糖皮質激素和促炎性細胞因子作為抑炎和促炎的兩種因子卻都可以誘導胎膜11β-HSD1的表達,但其分子機制目前尚未闡明。本課題采用免疫組織化學、常規(guī)PCR、Western blotting、實時熒光定量PCR、酶活性測定、啟動子克隆與活性測定、功能蛋白過表達、染色質免疫沉淀（ChIP）和凝膠電泳遷移實驗（EMSA）等技術,首... 

【文章來源】：復旦大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖0-1糖皮質激素代謝酶llp一HsD作用示意圖(引自AnthonyE.Michaeletal，ReProduction;2003:126，425.441)

1A26o=40.0林g/m!確定RNA的濃度，根據(jù)OD260/OD280比值判斷RNA的純度，OD260/OD280比值 1.8~2.0視為純度高。同時進行凝膠電泳觀察RNA是否降解(圖1一1)。HFL一 1LungLiver 285rRNA18SfRNA圖1一1瓊脂糖凝膠檢測人胎兒肺、肝組織和HFL一l細胞中提取的RNA是否降解;Fig.l一 1GelPictoresh()wedthequalityofRNAextraetedfromhumanfetal tissues(lungandliver)andhumanfetallungfibroblast(HFL一l). d)mRNA逆轉錄反應(反應體系30川):1.按測定RNA濃度計算后取1林g總RNA和1.5川oligodT(12一18)分別加入同一 0.5ml離心管中，并用nEPC水補足至總體積14林l;11.將離心管放入PCR儀中，按65℃ 5min和4℃15秒程序反應;111.暫停逆轉錄j泛應，各管加入混合液 17.5林 l(5XBuffer6林l， ZmMdNTp7.5林l)，42oC反應 2min;iv.加入逆轉錄酶1閃，依次按以下條件反應:42℃ 45min，70℃10 min

3.2人胎兒肺組織與胎肺成纖維細胞(HFL一 1)1lp一HSDI蛋白的表達免疫組織化學染色結果顯示，妊娠期8個月胎兒肺小支氣管和細支氣管上皮細胞(圖1一4A、B、C)、小支氣管間質組織成纖維細胞(圖1一4A、C)都有11p一HSDI蛋白表達，肺泡囊(圖1一4D)和靜脈內(nèi)皮細胞(圖1一4E)也表達11p一HSDI蛋白，而軟骨組織則無11p一HsDI蛋白表達(圖1一4A、B)。免疫組織化學染色陰性對照和妊娠期4個月胎兒肺組織中未能檢測到明顯的陽性染色(圖l一4F、G)。


本文編號：3491882