肺炎鏈球菌減毒活菌疫苗D39△CPS-TA的安全性、免疫保護(hù)效果及機(jī)制研究
發(fā)布時(shí)間：2021-11-14 06:19
目的：肺炎鏈球菌是一種革蘭陽性條件致病菌，可引起肺炎、敗血癥、腦膜炎、中耳炎等多種急性感染性疾病，在全世界范圍內(nèi)特別是發(fā)展中國家具有極高的發(fā)病率和病死率。疫苗是預(yù)防肺炎鏈球菌感染的有效手段。但目前可用的莢膜多糖疫苗和莢膜多糖蛋白結(jié)合疫苗均存在生產(chǎn)成本高、可覆蓋血清型有限及血清型置換等問題，極大地限制了這些疫苗在低收入國家的推廣使用。因此近年來，新型肺炎鏈球菌疫苗一直是研究的熱點(diǎn)。減毒活菌疫苗具有免疫原性強(qiáng)、血清型覆蓋廣、生產(chǎn)成本較低等特點(diǎn)，是一類具有發(fā)展?jié)摿Φ囊呙�，但其安全性必須重點(diǎn)考慮。本課題組在前期肺炎鏈球菌缺陷菌構(gòu)建實(shí)驗(yàn)中得到了一株2型無莢膜的肺炎鏈球菌突變株D39△CPS-TA。該菌株由于spd1672缺失致細(xì)菌磷壁酸表達(dá)量顯著減少，但其莢膜缺失的原因一直未知。該菌株高度減毒，高劑量感染不致小鼠死亡。我們嘗試將其作為減毒活菌疫苗免疫小鼠，初步發(fā)現(xiàn)可以產(chǎn)生一定的保護(hù)作用，有望開發(fā)成商品化的減毒活菌疫苗。本研究擬在探索D39△CPS-TA莢膜缺失原因、明確D39△CPS-TA基因背景的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)性地評(píng)價(jià)其安全性和粘膜免疫小鼠的保護(hù)效果，并對(duì)其免疫保護(hù)機(jī)制進(jìn)行深入研究，為該疫苗的進(jìn)...
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：104 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
D39△CPS-TA的莢膜多糖表達(dá)量Figure1-1.ExpressionofcapsularpolysaccharideofD39△CPS-TA
圖 1-2 D39△ C PS-TA 與 D39 的 cps2A-2D 表達(dá)差異Figure 1-2. Different expression of cps2A-2D between D39 and D39△ 上：cps2A-2D 的熒光定量；下：對(duì)照基因 CbpA、LytA 和 NanA 的 D39△ CPS-TA 的 cps 基因簇上游調(diào)控序列點(diǎn)3713 導(dǎo)致調(diào)控基因表達(dá)量下調(diào)為了進(jìn)一步證明的確是D39△CPS-TA的cps基因簇上游調(diào)控序C313713 引起了莢膜多糖合成基因 cps 表達(dá)量下降，我們將 D3 基因簇上游調(diào)控序列片段分別插入到 pAE03 質(zhì)粒和 pEVP3 質(zhì)粒別位于 GFP 上游和 LacZ 上游），利用 GFP 的表達(dá)量和 β-半乳映調(diào)控序列的調(diào)控能力。如果這段序列確實(shí)因?yàn)辄c(diǎn)突變而調(diào)控 的表達(dá)量減少，β-半乳糖苷酶的活性下降。
圖 1-3 cps 基因簇上游調(diào)控序列片段擴(kuò)增和重組質(zhì)粒雙酶切鑒定re 1-3. Apmplication of cps operon fragment and double enzyme digesidentification of recombinant plasmidPrimerStar 擴(kuò)增目的片段，M 為 marker，1 為 D39, 2 為 D39△ CPS-重組質(zhì)粒雙酶切鑒定，M 為 marker，1 為 D39-cps-operon-pAE03，2-TA-cps-operon-pAE03，使用 EcoR I 和 Not I 雙酶切；3 為 D39-cps-oper4 為 D39△ CPS-TA-cps-operon-pEVP3，使用 Sma I 和 BgI II 雙酶切相鄰兩條泳帶，左邊為重組質(zhì)粒未雙酶切，右邊為重組質(zhì)粒雙酶切 1-4 所示，與轉(zhuǎn)化了 D39cps 基因簇上游調(diào)控序列片段的重組肺3-cps-operon 的 GFP 相比，轉(zhuǎn)化了 D39△CPS-TA cps 基因簇上重組肺炎鏈球菌 D39-pAE03-cps-operon 的 GFP 表達(dá)量降低約 S-TA 的 cps 基因簇上游調(diào)控序列中的點(diǎn)突變 T→C313713 引起
【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]減毒活疫苗D39ΔCPS-TA對(duì)小鼠感染肺炎鏈球菌的保護(hù)效果和機(jī)制研究[D]. 姚潤.重慶醫(yī)科大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3494118
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：104 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
D39△CPS-TA的莢膜多糖表達(dá)量Figure1-1.ExpressionofcapsularpolysaccharideofD39△CPS-TA
圖 1-2 D39△ C PS-TA 與 D39 的 cps2A-2D 表達(dá)差異Figure 1-2. Different expression of cps2A-2D between D39 and D39△ 上：cps2A-2D 的熒光定量；下：對(duì)照基因 CbpA、LytA 和 NanA 的 D39△ CPS-TA 的 cps 基因簇上游調(diào)控序列點(diǎn)3713 導(dǎo)致調(diào)控基因表達(dá)量下調(diào)為了進(jìn)一步證明的確是D39△CPS-TA的cps基因簇上游調(diào)控序C313713 引起了莢膜多糖合成基因 cps 表達(dá)量下降，我們將 D3 基因簇上游調(diào)控序列片段分別插入到 pAE03 質(zhì)粒和 pEVP3 質(zhì)粒別位于 GFP 上游和 LacZ 上游），利用 GFP 的表達(dá)量和 β-半乳映調(diào)控序列的調(diào)控能力。如果這段序列確實(shí)因?yàn)辄c(diǎn)突變而調(diào)控 的表達(dá)量減少，β-半乳糖苷酶的活性下降。
圖 1-3 cps 基因簇上游調(diào)控序列片段擴(kuò)增和重組質(zhì)粒雙酶切鑒定re 1-3. Apmplication of cps operon fragment and double enzyme digesidentification of recombinant plasmidPrimerStar 擴(kuò)增目的片段，M 為 marker，1 為 D39, 2 為 D39△ CPS-重組質(zhì)粒雙酶切鑒定，M 為 marker，1 為 D39-cps-operon-pAE03，2-TA-cps-operon-pAE03，使用 EcoR I 和 Not I 雙酶切；3 為 D39-cps-oper4 為 D39△ CPS-TA-cps-operon-pEVP3，使用 Sma I 和 BgI II 雙酶切相鄰兩條泳帶，左邊為重組質(zhì)粒未雙酶切，右邊為重組質(zhì)粒雙酶切 1-4 所示，與轉(zhuǎn)化了 D39cps 基因簇上游調(diào)控序列片段的重組肺3-cps-operon 的 GFP 相比，轉(zhuǎn)化了 D39△CPS-TA cps 基因簇上重組肺炎鏈球菌 D39-pAE03-cps-operon 的 GFP 表達(dá)量降低約 S-TA 的 cps 基因簇上游調(diào)控序列中的點(diǎn)突變 T→C313713 引起
【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]減毒活疫苗D39ΔCPS-TA對(duì)小鼠感染肺炎鏈球菌的保護(hù)效果和機(jī)制研究[D]. 姚潤.重慶醫(yī)科大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3494118
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