發(fā)布時間：2021-11-06 08:59

　　乙肝病毒（HBV）包膜蛋白由3個區(qū)域組成：與肝細胞直接作用的含有108或119個氨基酸殘基的preS1，通過多聚白蛋白間接與之作用的含有55個氨基酸殘基的preS2區(qū)域，和含有226個氨基酸殘基的S蛋白區(qū)。許多研究證明，帶有preS1和preS2序列的乙肝表面抗原（HBsAg）有望成為新一代更高效的乙肝疫苗。巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）是近年興起的一個重組蛋白生產系統(tǒng)，以其獨特的優(yōu)勢在生物工程應用中不斷得到推廣。本論文就HBV包膜M蛋白在原核大腸桿菌（E．coli）和真核Pichia系統(tǒng)的表達、性質鑒定及免疫原性等進行了系統(tǒng)詳細的研究。 在原核系統(tǒng)中表達preS2多肽，為HBV包膜M蛋白的活性檢測提供材料。將人工合成preS2的全基因插入E．coli表達載體pThioHisA，以硫氧還蛋白融合蛋白的形式實現高效表達。經滲透壓處理初步純化蛋白，獲得了具有preS2抗原性的thioredoxin-preS2融合蛋白。 為了在Pichia系統(tǒng)中高效表達HBV包膜M蛋白，用限制性內切酶SacI+SalI消化質粒pPIC3.5k和pAO815，替換對等部分，組成新... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數】：133 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

persZpeR擴增結果

(185bP)·(二)、重組質粒pThi0HsiA一perZS的構建及序列分析酶切鑒定(圖1.3)及DNA測序結果(圖1.4)表明，pThioHisA一preSZ構建正確，persZ基因序列與預期的一致。

pThofHiAs·persZ在大腸桿菌B卜21D(E3)中不同誘導onofPThioHiAs·PerSZin.EeoliBL·21(DE3)atdieffrentlarweihgtstnaddar(middlenarge);1.CelllysateofBLZlysateofBLZIP/ThioHiAs一PreSZ2hoursatferIPTGinerSZ4housr峨erIPTGinduetion:4.CelllysateofBLZn;5.CelllyasteofBLZI/PThioHisA一PreSZ8hoursatfioHiAs·PreSZ8hoursatferuninduetion·重組蛋白的初步純化經過20%蔗糖滲透壓處理后，基本上分子量為19KD的presZ融合表達蛋白，粒p瓏。HisA的表達產物htoierdxoni存在于處理液上清中的含量有38%(

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3479546