乙肝病毒（HBV）包膜蛋白由3個(gè)區(qū)域組成：與肝細(xì)胞直接作用的含有108或119個(gè)氨基酸殘基的preS1，通過(guò)多聚白蛋白間接與之作用的含有55個(gè)氨基酸殘基的preS2區(qū)域，和含有226個(gè)氨基酸殘基的S蛋白區(qū)。許多研究證明，帶有preS1和preS2序列的乙肝表面抗原（HBsAg）有望成為新一代更高效的乙肝疫苗。巴斯德畢赤酵母（Pichia pastoris）是近年興起的一個(gè)重組蛋白生產(chǎn)系統(tǒng)，以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在生物工程應(yīng)用中不斷得到推廣。本論文就HBV包膜M蛋白在原核大腸桿菌（E．coli）和真核Pichia系統(tǒng)的表達(dá)、性質(zhì)鑒定及免疫原性等進(jìn)行了系統(tǒng)詳細(xì)的研究。 在原核系統(tǒng)中表達(dá)preS2多肽，為HBV包膜M蛋白的活性檢測(cè)提供材料。將人工合成preS2的全基因插入E．coli表達(dá)載體pThioHisA，以硫氧還蛋白融合蛋白的形式實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。經(jīng)滲透壓處理初步純化蛋白，獲得了具有preS2抗原性的thioredoxin-preS2融合蛋白。 為了在Pichia系統(tǒng)中高效表達(dá)HBV包膜M蛋白，用限制性內(nèi)切酶SacI+SalI消化質(zhì)粒pPIC3.5k和pAO815，替換對(duì)等部分，組成新... 

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【部分圖文】：

persZpeR擴(kuò)增結(jié)果

(185bP)·(二)、重組質(zhì)粒pThi0HsiA一perZS的構(gòu)建及序列分析酶切鑒定(圖1.3)及DNA測(cè)序結(jié)果(圖1.4)表明，pThioHisA一preSZ構(gòu)建正確，persZ基因序列與預(yù)期的一致。

pThofHiAs·persZ在大腸桿菌B卜21D(E3)中不同誘導(dǎo)onofPThioHiAs·PerSZin.EeoliBL·21(DE3)atdieffrentlarweihgtstnaddar(middlenarge);1.CelllysateofBLZlysateofBLZIP/ThioHiAs一PreSZ2hoursatferIPTGinerSZ4housr峨erIPTGinduetion:4.CelllysateofBLZn;5.CelllyasteofBLZI/PThioHisA一PreSZ8hoursatfioHiAs·PreSZ8hoursatferuninduetion·重組蛋白的初步純化經(jīng)過(guò)20%蔗糖滲透壓處理后，基本上分子量為19KD的presZ融合表達(dá)蛋白，粒p瓏。HisA的表達(dá)產(chǎn)物htoierdxoni存在于處理液上清中的含量有38%(

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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