發(fā)布時(shí)間：2021-11-05 07:52

　　肌肉組織的發(fā)育及其功能由多種基因控制，基因功能失常則引發(fā)相應(yīng)的疾病。肌肉發(fā)育相關(guān)基因的發(fā)現(xiàn)為肌肉疾病的診斷和治療提供潛在的靶點(diǎn)，同時(shí)也為肌肉干細(xì)胞的增殖、分化及其應(yīng)用提供指導(dǎo)，具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際意義。小鼠伴肌動(dòng)蛋白相關(guān)錨定蛋白（nebulin related anchoring protein，N-RAP）特異表達(dá)于骨骼肌和心肌組織，是肌纖維組裝的引發(fā)中心。它在MLP（muscle LIM protein，MLP）敲除和tropomodulin轉(zhuǎn)基因小鼠中的表達(dá)都上調(diào)，提示有可能作為擴(kuò)張型心肌�。╠ilated cardiomyopathy，DCM）的早期標(biāo)志。 我們獲得了一條在胎兒和成人骨骼肌中差異表達(dá)的與小鼠N-RAP有86％相似性的新EST序列（GenBank登錄號(hào)為BQ091951），它可能代表小鼠N-RAP基因在人類中的同源物。本研究利用生物信息學(xué)分析工具和分子生物學(xué)技術(shù)，從成人骨骼肌噬菌體cDNA文庫(kù)中成功地克隆了人N-RAP基因的全長(zhǎng)cDNA序列。人N-RAP基因cDNA序列含有一個(gè)5088bp的開放讀碼框，多聚腺苷酸加尾信號(hào)在第5375位（ATTAAA），第... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

用小鼠N~RAP基因全長(zhǎng)cDNA序列搜索人類基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)果

體序列有高度相似性，說(shuō)明人類確實(shí)存在與小鼠入八尺通尸同源的基因(圖1.1)。用小鼠入入尺通尸基因全長(zhǎng)。DNA序列搜索人類EST數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)有多條EST序列與小鼠刃場(chǎng)MP基因高度相似(圖1.2)。根據(jù)對(duì)應(yīng)的基因組序列、EST序列和我們獲得的新EST序列，我們?cè)O(shè)計(jì)2對(duì)引物Pl、P2和P3、P4。用PCR方法，從成人骨骼肌噬菌體cDNA文庫(kù)中分別獲得了約Zkb(上游片段)和1.skb(下游片段)的特異條帶，測(cè)序后拼接，發(fā)現(xiàn)并沒(méi)有完整的開放讀碼框(ORF)。為此，將獲得的約3.7kb片段搜索人類EST數(shù)據(jù)庫(kù)(圖1.3)和nr數(shù)據(jù)庫(kù)(圖1.4)，進(jìn)行電子延伸，得到約5.4kb的電子延伸產(chǎn)物。據(jù)此設(shè)計(jì)引物P5、P6、P7和P8，進(jìn)行巢式PCR

P2和P3、P4。用PCR方法，從成人骨骼肌噬菌體cDNA文庫(kù)中分別獲得了約Zkb(上游片段)和1.skb(下游片段)的特異條帶，測(cè)序后拼接，發(fā)現(xiàn)并沒(méi)有完整的開放讀碼框(ORF)。為此，將獲得的約3.7kb片段搜索人類EST數(shù)據(jù)庫(kù)(圖1.3)和nr數(shù)據(jù)庫(kù)(圖1.4)，進(jìn)行電子延伸，得到約5.4kb的電子延伸產(chǎn)物。據(jù)此設(shè)計(jì)引物P5、P6、P7和P8，進(jìn)行巢式PCR，從成人骨骼肌噬菌體。DNA文庫(kù)中獲得了約5.Ikb的特異條帶(圖1.5)。

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]吉富羅非魚肝臟FAS、CAT基因的克隆及脂肪和膽堿、投飼率和投飼水平對(duì)其表達(dá)的影響[D]. 程遠(yuǎn).廣西大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3477386