本文關(guān)鍵詞：抗莪術(shù)醇單鏈抗體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：利用抗體基因工程的方法得到高親和力的抗莪術(shù)醇單鏈抗體蛋白。 方法：利用RT-PCR及分子克隆的技術(shù)，從分泌抗莪術(shù)醇單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中克隆編碼抗體重鏈及輕鏈的基因；利用重疊延伸PCR的方法構(gòu)建抗莪術(shù)醇單鏈抗體基因，并將該基因克隆到大腸桿菌表達(dá)載體中；在細(xì)菌中誘導(dǎo)表達(dá)抗莪術(shù)醇單鏈抗體，并利用ELISA的方法測定抗莪術(shù)醇單鏈抗體與莪術(shù)醇的結(jié)合能力。 結(jié)果：利用RT-PCR的方法獲得了抗體輕鏈及重鏈Fab片段基因，并克隆在了T載體中，長度為620bp左右；測序后序列分析表明我們獲得的抗體基因?yàn)槿碌目贵w基因，在GeneBank中沒有報(bào)道。利用重疊延伸PCR的方法將輕鏈和重鏈基因的可變區(qū)通過多聚甘氨酸接頭連接為單鏈抗體，所得單鏈抗體基因長度為750bp左右。利用PCR克隆的方法將單鏈抗體基因３末端加入Flag標(biāo)簽序列，并克隆到細(xì)菌表達(dá)載體pET21a中得到質(zhì)粒pET21a ScFvFlag６XHis（pET21ScFvFH），測序結(jié)果表明基因表達(dá)框正確，沒有發(fā)生突變。將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3），利用IPTG誘導(dǎo)2小時(shí)后，，Westernblot檢測到ScFv的表達(dá)，大約有95%的ScFv蛋白存在于包涵體，5%的ScFv蛋白為有活力的可溶性蛋白，分子量為34KD。利用ELISA檢測到ScFv蛋白高特異性抗莪術(shù)醇活力。 結(jié)論：此項(xiàng)研究工作利用基因工程的系列方法，從分泌抗莪術(shù)醇的雜交瘤細(xì)胞株中成功地構(gòu)建了抗莪術(shù)醇單鏈抗體基因，并且在細(xì)菌中表達(dá)出了可溶性單鏈抗體蛋白，所表達(dá)的單鏈抗體具有高特異性抗莪術(shù)醇化合物活力。
【關(guān)鍵詞】：ScFv VL VH 大腸桿菌 表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英漢縮略詞對(duì)照表9-11
• 前言11-14
• 1 材料與方法14-32
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.4 主要溶液的配制16-17
• 1.5 引物17-19
• 1.6 實(shí)驗(yàn)方法19-32
• 2 結(jié)果32-39
• 2.1 雜交瘤細(xì)胞總 RNA 的提取32
• 2.2 RT-PCR 法擴(kuò)增編碼抗莪術(shù)醇抗體基因片段32-33
• 2.3 抗莪術(shù)醇抗體輕鏈及重鏈基因克隆，測序，序列分析33-34
• 2.4 抗莪術(shù)醇 ScFv 的構(gòu)建34-37
• 2.5 抗莪術(shù)醇 ScFv 基因的序列分析37
• 2.6 抗莪術(shù)醇 ScFv 在大腸桿菌中表達(dá)37-38
• 2.7 抗莪術(shù)醇 ScFv 免疫活性檢測38-39
• 討論39-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 綜述46-58
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄58-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡春艷;劉全忠;;單克隆抗體制備技術(shù)及應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

2 沈倍奮;抗體藥物研究進(jìn)展[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年10期

3 羅萍;治療性單克隆抗體研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年05期

4 崔銀珠;單克隆抗體的臨床應(yīng)用[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2001年01期

5 何云燕;夏云;;基因工程單鏈抗體及其應(yīng)用[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年09期

6 孔念華;莪術(shù)油治療急性上呼吸道感染40例報(bào)告[J];荊門職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年06期

7 馬穎;鄒全明;;單鏈抗體及其在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];免疫學(xué)雜志;2006年S1期

8 林蕓,閻錫蘊(yùn);人源化抗體研究歷程及發(fā)展趨勢[J];生物工程學(xué)報(bào);2004年01期

9 譚立欣,季加孚;抗癌新藥欖香烯乳治療晚期惡性腫瘤的臨床評(píng)價(jià)[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;1997年03期

10 程國平,劉明海;莪術(shù)油治療流行性腮腺炎的臨床對(duì)照試驗(yàn)[J];藥物流行病學(xué)雜志;1999年04期

  本文關(guān)鍵詞：抗莪術(shù)醇單鏈抗體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：347064