本文關(guān)鍵詞：H1N1亞型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株的選育及甲型流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株的ELISA檢測(cè)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流感病毒減毒活疫苗采用滴鼻途徑免疫,能激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫、體液免疫和黏膜免疫,具有減免注射疼痛,免疫保護(hù)作用持久,有一定的交叉保護(hù)作用等優(yōu)點(diǎn)。目前上市的流感病毒減毒活疫苗是以雞胚為培養(yǎng)基質(zhì)生產(chǎn)的。然而,使用雞胚生產(chǎn)流感疫苗還存在著許多不足：遺傳性狀穩(wěn)定性差,降低了保護(hù)效果；交叉保護(hù)作用差；容易被其他致病因子所污染；純化工藝復(fù)雜；難以大規(guī)模生產(chǎn)等。Vero細(xì)胞是WHO推薦用于疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì),用其培養(yǎng)的流感病毒遺傳穩(wěn)定性好,質(zhì)量更高,還可實(shí)現(xiàn)規(guī)�；a(chǎn)以滿(mǎn)足流感大流行的需要。 流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株是用流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株通過(guò)在低溫下連續(xù)傳代培養(yǎng)選育而出。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)溫度梯度降溫法成功選育出了一株能在25℃生長(zhǎng)的H1N1亞型流感病毒冷適應(yīng)株,血凝效價(jià)維持在1：512以上。對(duì)該毒株在低溫培養(yǎng)時(shí)的PH值、TPCK胰酶的添加、BSA終濃度等條件進(jìn)行了優(yōu)化,并確定了病毒的適宜收獲時(shí)間。通過(guò)免疫熒光、血凝抑制試驗(yàn)以及感染性滴度測(cè)定對(duì)該毒株的生物學(xué)性狀進(jìn)行了鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該毒株與H1N1亞型Vero細(xì)胞適應(yīng)株為同一亞型。通過(guò)對(duì)該毒株在25℃、33℃、39℃的TCID50ml-2的比較,確定該毒株具有ts表型和ca表型。通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增出該株流感病毒的8個(gè)基因片段,并將NA、NS、NP、M四個(gè)基因成功連接到雙向轉(zhuǎn)錄載體PHW2000上,并進(jìn)行基因測(cè)序分析。通過(guò)與對(duì)應(yīng)母本株基因的比對(duì),確定了突變位點(diǎn),為流感病毒冷適應(yīng)的相關(guān)基因研究奠定了基礎(chǔ)。 為了便于Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株的選育,通過(guò)測(cè)定包被抗體、第二抗體和酶標(biāo)抗體最佳工作濃度,建立了雙抗體夾心ELISA檢測(cè)甲型流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株病毒的方法。對(duì)已知的陽(yáng)性樣品,雙抗體夾心ELISA法測(cè)定的病毒滴度比血凝方法測(cè)定病毒滴度靈敏度高。該方法操作簡(jiǎn)單、敏感性高,可應(yīng)用于流感病毒的檢測(cè)。
【關(guān)鍵詞】：Vero細(xì)胞 流感病毒 冷適應(yīng) ELISA
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R373.13
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 第一部分 H1N1亞型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株的選育7-36
• 前言7-10
• 一、實(shí)驗(yàn)材料10-12
• 二、實(shí)驗(yàn)方法12-19
• 三、結(jié)果與分析19-28
• 四、討論28-32
• 五、小結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 第二部分 甲型流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株的ELISA法檢測(cè)36-46
• 前言36
• 一、實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 二、實(shí)驗(yàn)方法37-39
• 三、結(jié)果和分析39-42
• 四、討論42-43
• 五、小結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 附錄46-67
• 致謝67-68
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷68-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：H1N1亞型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株的選育及甲型流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株的ELISA檢測(cè)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：347139