發(fā)布時間：2017-05-05 22:05

  本文關(guān)鍵詞：H1N1亞型流感病毒Vero細胞冷適應(yīng)株的選育及甲型流感病毒Vero細胞適應(yīng)株的ELISA檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：流感病毒減毒活疫苗采用滴鼻途徑免疫,能激發(fā)機體的細胞免疫、體液免疫和黏膜免疫,具有減免注射疼痛,免疫保護作用持久,有一定的交叉保護作用等優(yōu)點。目前上市的流感病毒減毒活疫苗是以雞胚為培養(yǎng)基質(zhì)生產(chǎn)的。然而,使用雞胚生產(chǎn)流感疫苗還存在著許多不足：遺傳性狀穩(wěn)定性差,降低了保護效果；交叉保護作用差；容易被其他致病因子所污染；純化工藝復(fù)雜；難以大規(guī)模生產(chǎn)等。Vero細胞是WHO推薦用于疫苗生產(chǎn)的細胞基質(zhì),用其培養(yǎng)的流感病毒遺傳穩(wěn)定性好,質(zhì)量更高,還可實現(xiàn)規(guī)�；a(chǎn)以滿足流感大流行的需要。 流感病毒Vero細胞冷適應(yīng)株是用流感病毒Vero細胞適應(yīng)株通過在低溫下連續(xù)傳代培養(yǎng)選育而出。本實驗通過溫度梯度降溫法成功選育出了一株能在25℃生長的H1N1亞型流感病毒冷適應(yīng)株,血凝效價維持在1：512以上。對該毒株在低溫培養(yǎng)時的PH值、TPCK胰酶的添加、BSA終濃度等條件進行了優(yōu)化,并確定了病毒的適宜收獲時間。通過免疫熒光、血凝抑制試驗以及感染性滴度測定對該毒株的生物學(xué)性狀進行了鑒定。實驗結(jié)果表明該毒株與H1N1亞型Vero細胞適應(yīng)株為同一亞型。通過對該毒株在25℃、33℃、39℃的TCID50ml-2的比較,確定該毒株具有ts表型和ca表型。通過RT-PCR擴增出該株流感病毒的8個基因片段,并將NA、NS、NP、M四個基因成功連接到雙向轉(zhuǎn)錄載體PHW2000上,并進行基因測序分析。通過與對應(yīng)母本株基因的比對,確定了突變位點,為流感病毒冷適應(yīng)的相關(guān)基因研究奠定了基礎(chǔ)。 為了便于Vero細胞冷適應(yīng)株的選育,通過測定包被抗體、第二抗體和酶標抗體最佳工作濃度,建立了雙抗體夾心ELISA檢測甲型流感病毒Vero細胞適應(yīng)株病毒的方法。對已知的陽性樣品,雙抗體夾心ELISA法測定的病毒滴度比血凝方法測定病毒滴度靈敏度高。該方法操作簡單、敏感性高,可應(yīng)用于流感病毒的檢測。
【關(guān)鍵詞】：Vero細胞 流感病毒 冷適應(yīng) ELISA
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373.13
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 第一部分 H1N1亞型流感病毒Vero細胞冷適應(yīng)株的選育7-36
• 前言7-10
• 一、實驗材料10-12
• 二、實驗方法12-19
• 三、結(jié)果與分析19-28
• 四、討論28-32
• 五、小結(jié)32-33
• 參考文獻33-36
• 第二部分 甲型流感病毒Vero細胞適應(yīng)株的ELISA法檢測36-46
• 前言36
• 一、實驗材料36-37
• 二、實驗方法37-39
• 三、結(jié)果和分析39-42
• 四、討論42-43
• 五、小結(jié)43-44
• 參考文獻44-46
• 附錄46-67
• 致謝67-68
• 個人簡歷68-69

【參考文獻】

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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  本文關(guān)鍵詞：H1N1亞型流感病毒Vero細胞冷適應(yīng)株的選育及甲型流感病毒Vero細胞適應(yīng)株的ELISA檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：347139