本文關(guān)鍵詞：Diamond-Blackfan貧血斑馬魚模型的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Diamond-Blackfan貧血(Diamond-Blackfan anemia, DBA)即先天性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血,是一種罕見的遺傳性骨髓衰竭綜合征。它的典型特征是純紅細(xì)胞后天的合成障礙和身體器官的發(fā)育的異常。目前已有研究證實,核糖體蛋白質(zhì)的缺乏能夠?qū)е略偕系K性貧血。在該病的病案中,核糖體蛋白質(zhì)S19(RPS19)是發(fā)生突變頻率最高的一種核糖體蛋白質(zhì)基因。一些研究表明,p53依賴的基因和通路在RPS19缺乏的斑馬魚胚胎中發(fā)揮著重要的作用。然而,在再生障礙性貧血的斑馬魚模型中,是否存在除p53之外的調(diào)控再生障礙性貧血的異常表型的其他重要因子尚未清楚。因此,在本課題中,我們構(gòu)建了RPS19基因敲低(RPS19morpholino), RPS19和p53基因同時敲低(RPS19+p53morpholino)和正常對照(Control morpholino)三種斑馬魚模型,并利用RNA-Seq技術(shù)對這三種斑馬魚模型的胚胎樣本進(jìn)行了高通量的轉(zhuǎn)錄組測序研究。 我們發(fā)現(xiàn)：在RPS19基因敲低的樣本和正常對照樣本比較中,與造血系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育以及與骨骼和肌肉疾病等功能相關(guān)的基因的表達(dá)具有顯著的差異。而同時抑制p53的表達(dá),則可以部分的恢復(fù)由RPS19缺乏導(dǎo)致的斑馬魚胚胎的異常表型。此外,我們還確定了基因組范圍內(nèi)的由RPS19缺乏引起的依賴p53和不依賴p53的異常調(diào)控的基因和通路。以上結(jié)果顯示,不僅p53家族的成員在RPS19缺乏的斑馬魚胚胎中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,還存在其他一些重要的因子,它們獨立于p53的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),但同樣具有重要的調(diào)控作用。明確在由RPS19缺乏導(dǎo)致的斑馬魚胚胎中異常調(diào)控的基因、信號通路和分子網(wǎng)絡(luò),對發(fā)現(xiàn)潛在的Diamond-Blackfan貧血的致病基因和異常的信號通路,提供了重要的理論依據(jù),同時也為研究其它貧血性疾病的發(fā)病機(jī)制和尋找治療靶點開拓了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：斑馬魚 DBA RPS19 p53 I斟A-Seq
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院北京基因組研究所
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R556.5;R-332
【目錄】：

• 致謝5-7
• 摘要7-8
• ABSTRACT8-9
• 專業(yè)詞匯中英文對照表9-12
• 引言12-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-21
• 1. Diamond-Blackfan貧血的研究13-16
• 1.1 臨床研究13-15
• 1.2 遺傳學(xué)研究15
• 1.3 p53在DBA的病理生理過程中的作用15-16
• 2. 斑馬魚模型的應(yīng)用16-18
• 3. 轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的發(fā)展18-21
• 第二章 材料與方法21-27
• 1. 實驗材料21
• 2. 主要化學(xué)試劑和試劑盒21
• 3. 實驗方法21-23
• 3.1 斑馬魚的培育21
• 3.2 顯微注射morpholino RNA21-22
• 3.3 血紅蛋白染色22
• 3.4 RNA制備22-23
• 3.5 文庫構(gòu)建和測序23
• 4 數(shù)據(jù)分析方法23-27
• 4.1 RNA-Seq數(shù)據(jù)在基因組上的注釋23-24
• 4.2 基因表達(dá)譜分析24-25
• 4.3 聚類分析25
• 4.4 基因的功能注釋及網(wǎng)絡(luò)分析25-27
• 第三章 結(jié)果與討論27-45
• 1. RPS 19 MO和RPS 19+p53 MO的斑馬魚表型分析27-28
• 2. RNA-Seq數(shù)據(jù)處理28-31
• 3. RPS19 MO的表達(dá)譜特征分析31-34
• 4. RPS19+p53 MO的表達(dá)譜特征分析34-37
• 5. 與造血相關(guān)的基因的表達(dá)變化分析37-38
• 6. p53依賴和p53不依賴的通路分析38-45
• 第四章 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 附錄53-59
• 作者簡介及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果59

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：346496