許多研究結(jié)果表明堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）直接與成骨細(xì)胞聯(lián)合植入體內(nèi)能明顯促進(jìn)骨形成過程，這對臨床治療骨折、骨缺損、骨壞死等骨科疾病有一定的效果。但是bFGF在體內(nèi)易降解，因此bFGF和成骨細(xì)胞聯(lián)合植入時(shí)直接外源給予bFGF需反復(fù)多次注射，造成使用不方便、易感染，而且bFGF濃度不易控制，影響療效。因此本課題設(shè)計(jì)基因治療與骨組織工程學(xué)相結(jié)合的方法以改變外源性加入bFGF蛋白的不足之處，即將成骨細(xì)胞經(jīng)bFGF基因轉(zhuǎn)染后進(jìn)行體外擴(kuò)增，并進(jìn)一步研究其體內(nèi)外成骨能力，得出如下結(jié)果： 應(yīng)用PCR技術(shù)從克隆載體PBR322-bFGF載體上擴(kuò)增獲得bFGF cDNA基因，采用基因重組技術(shù)將bFGF cDNA克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.1和pEGFP-C3上。重組質(zhì)粒分別經(jīng)雙酶切、PCR分析及序列測定驗(yàn)證了插入片段的正確性后，用脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-bFGF和pEGFP-C3-bFGF轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞的熒光表達(dá)情況，細(xì)胞爬片免疫組化以及細(xì)胞培養(yǎng)上清的ELISA檢測bFGF表達(dá)情況。結(jié)果表... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

制備組織工程產(chǎn)品的一般步驟〔引Fig.1一1ProeessofPreParationTissueEngineeringProduets

組織工程一樣即:種子細(xì)胞、生物載體材料以及調(diào)節(jié)信號因子。隨著細(xì)胞生物學(xué)、材料科學(xué)以及分子生物學(xué)的發(fā)展，骨組織工程學(xué)在種子細(xì)胞、材料支架、調(diào)節(jié)信號因子方面取得一定的進(jìn)展。圖1一3是骨組織工程移植原理圖「，91:圖1一3骨組織工程體內(nèi)移植的原理圖Fig.1一3DiagramofPrineiPleofBoneTissueinvivotransPlant1.2.1種子細(xì)胞一一成骨細(xì)胞的研究現(xiàn)狀骨組織工程學(xué)研究中效應(yīng)細(xì)胞可用未分化間充質(zhì)細(xì)胞或成骨細(xì)胞，間充質(zhì)細(xì)胞為多功能分化潛能細(xì)胞，必須在BMP誘導(dǎo)下才能向成骨方向分化，而成骨細(xì)胞因其本身已有向成骨方向分化的潛能，故不用BMP誘導(dǎo);而且間充質(zhì)細(xì)胞主要來源于骨髓，成骨細(xì)胞來源于骨膜、骨組織，因?yàn)槌赡陝?dòng)物骨髓中間充質(zhì)細(xì)胞數(shù)量隨年齡的增大而明顯減少，故骨組織工程學(xué)研究常采用培養(yǎng)成骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞〔2。〕。1.2.1.1成骨細(xì)胞的形態(tài)和生化特點(diǎn)在生長活躍的骨組織內(nèi)大致可分辨出四種細(xì)胞成分

圖1一5脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移原理圖〔10，，F(xiàn)ig.1一5PrineiPleofLIPosome一mediatedGeneTransefr響陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)基因的因素子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)基因的效率主要與陽離子脂質(zhì)體的組成、脂質(zhì)與基因

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]bFGF真核表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[J]. 張麗君,丁煥文,王捷,郭勇,楊傳紅,冼江,鄭文嶺.  華南理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2002(08)
[2]bFGF熒光真核表達(dá)載體構(gòu)建及表達(dá)[J]. 張麗君,王捷,丁煥文,郭勇,楊傳紅,冼江,鄭文嶺.  廣東醫(yī)學(xué). 2002(08)
[3]組織細(xì)胞中膠原蛋白的提取及ECL-Western blot分析[J]. 劉德莉,徐蓉,吳娟娟,夏萬堯,商慶新.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2001(03)
[4]人造生物皮膚[J]. 胡顯文.  生物技術(shù)通訊. 2000(03)
[5]堿性成纖維細(xì)胞生長因子的研究進(jìn)展[J]. 沈林南,魏東芝,俞俊棠.  生物工程進(jìn)展. 1999(01)
[6]經(jīng)皮注射自體骨膜細(xì)胞修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 宋守禮,朱盛修,張伯勛,黃靜香.  中華骨科雜志. 1997(11)
[7]同種異體成骨細(xì)胞與鈣磷陶瓷復(fù)合體內(nèi)植入的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 鄒力,楊志明,黃富國,傅榮.  中國修復(fù)重建外科雜志. 1997(05)
[8]陽離子脂質(zhì)體與基因轉(zhuǎn)移[J]. 袁仕善,周智廣.  生理科學(xué)進(jìn)展. 1997(02)
[9]陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的最優(yōu)化條件[J]. 王瓞,林其誰.  生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會通訊). 1997(01)
[10]骨膜成骨細(xì)胞培養(yǎng)與生物活性陶瓷復(fù)合的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 傅榮,楊志明.  中國修復(fù)重建外科雜志. 1996(04)



本文編號：3458884