本文關(guān)鍵詞：微流控芯片細(xì)胞分選平臺的構(gòu)建及其在上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：細(xì)胞體外實驗是生物醫(yī)學(xué)研究中不可缺少的重要組成部分，通過對細(xì)胞遷移、細(xì)胞間相互作用等細(xì)胞生命活動的相關(guān)體外實驗研究，將能夠揭示疾病的發(fā)生發(fā)展和其他生物學(xué)現(xiàn)象的內(nèi)在規(guī)律。這就要求體外實驗?zāi)軌蚋玫啬M體內(nèi)環(huán)境，使研究結(jié)果更接近于體內(nèi)實際。但傳統(tǒng)的對單一細(xì)胞進(jìn)行研究的方法卻不能滿足這一要求，迫切需要采取多種細(xì)胞共培養(yǎng)的模式，以滿足生命科學(xué)領(lǐng)域研究中對細(xì)胞功能分析的需要。目前共培養(yǎng)技術(shù)面臨的一個重要問題是，如何將共培養(yǎng)后的細(xì)胞分離出來，，以便于后續(xù)的生物學(xué)檢測。因此，細(xì)胞分選正日益成為細(xì)胞共培養(yǎng)檢測的首要任務(wù)。研究表明，不同種類的細(xì)胞，其大小多存在差異，據(jù)此可對細(xì)胞進(jìn)行分選。本文擬構(gòu)建一個可用于細(xì)胞分選的電場驅(qū)動的微流控芯片平臺，在該平臺上進(jìn)行人肺腺癌細(xì)胞A549與人肺支氣管上皮細(xì)胞16HBE的共培養(yǎng)及細(xì)胞分選，進(jìn)一步還將進(jìn)行上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的相關(guān)研究。 方法：設(shè)計并構(gòu)建一個可用于細(xì)胞分選的電驅(qū)動的微流控系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括一個微流控芯片、電子差分放大器及LabView數(shù)據(jù)處理分析系統(tǒng)等部分。將人肺腺癌細(xì)胞A549與人肺支氣管上皮細(xì)胞16HBE制備成細(xì)胞混合懸液并加入微流控芯片內(nèi)，因該兩種細(xì)胞大小不同，進(jìn)入檢測區(qū)將產(chǎn)生不同信號。通過程序設(shè)定，可依據(jù)該差異可控制雙極雙擲繼電器（Double Pole Double Throw，DPDT）的電壓轉(zhuǎn)換，利用其產(chǎn)生的瞬變低壓直流電作驅(qū)動力，來捕捉細(xì)胞完成目標(biāo)細(xì)胞分選。然后對分選后的細(xì)胞進(jìn)行臺盼藍(lán)染色，鑒定其活性。鑒定完畢后，將分選后的細(xì)胞置于微流控芯片上繼續(xù)培養(yǎng)，Hoechst33342/PI雙染檢測證實細(xì)胞凋亡率在一定范圍內(nèi)，后向微流控芯片內(nèi)加入TGF-β1(Transforming growth factor beta,轉(zhuǎn)化生長因子-β1)，誘導(dǎo)A549和16HBE發(fā)生EMT，檢測并分析該兩種細(xì)胞單獨培養(yǎng)以及共培養(yǎng)時EMT的不同變化。 結(jié)果：1.依據(jù)流體力學(xué)及電學(xué)原理，成功構(gòu)建了一個可用于細(xì)胞分選的電驅(qū)動微流控芯片系統(tǒng)，實現(xiàn)了按細(xì)胞尺寸大小分選細(xì)胞目的，即在電驅(qū)動下，直徑較大的A549細(xì)胞進(jìn)入了微流控芯片平臺上部的收集通道，直徑較小的16HBE細(xì)胞則進(jìn)入了平臺下部的收集通道；而且，臺盼藍(lán)染色顯示，電分選后，該兩種細(xì)胞活性均良好。此后，再將該兩種細(xì)胞在微流控芯片上連續(xù)培養(yǎng)48小時，亦未見顯著細(xì)胞凋亡，凋亡指數(shù)（AI）10％；2. TGF-β1誘導(dǎo)后，細(xì)胞在單獨培養(yǎng)模式下，16HBE較A549發(fā)生EMT所需時間分別為36小時和24小時，前者較后者延長了12小時；但將二者共培養(yǎng)后，EMT所需時間降為至12小時，與16HBE和A549單獨培養(yǎng)相比，均明顯縮短。 結(jié)論：本實驗設(shè)計構(gòu)建了一個可用于細(xì)胞電分選的微流控平臺，在該平臺上不僅成功進(jìn)行了人肺腺癌細(xì)胞A549與人肺支氣管上皮細(xì)胞16HBE的共培養(yǎng)和依據(jù)細(xì)胞不同大小進(jìn)行的電分選，還完成了該兩種細(xì)胞的EMT研究，提示這一電場驅(qū)動的微流控芯片平臺，能夠為細(xì)胞分選以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究提供了一個新的技術(shù)手段。
【關(guān)鍵詞】：微流控芯片 細(xì)胞分選 上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 1. 實驗材料13-15
• 2. 實驗流程15
• 3. 實驗方法15-17
• 4. 芯片上研究上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究17-19
• 5. 圖像分析19
• 結(jié)果19-21
• 1. 細(xì)胞分選及驗證平臺19-20
• 2. 上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化20
• 3. E-鈣黏連蛋白及 F-actin 免疫熒光檢測20-21
• 討論21-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 綜述29-40
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 附錄40-42
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況42-43
• 致謝43-44

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：微流控芯片細(xì)胞分選平臺的構(gòu)建及其在上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究中的應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：345639