本文關鍵詞：過氧化物酶增殖物激活受體γ（PPARγ）激動劑羅格列酮在血管新生和血管通透性變化中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腫瘤、動脈粥樣硬化和糖尿病視網(wǎng)膜病變等常伴隨有血管新生，新生微血管通過給病變組織提供氧和營養(yǎng)促進了上述疾病的發(fā)生和發(fā)展。而且新生微血管在結構和功能上缺乏完整性，主要表現(xiàn)為細胞連接和周細胞缺失以及基底膜不完整等病理特征，與血管通透性增加密切相關。高通透性血管有利于腫瘤細胞和炎癥細胞的浸潤以及促血管生成因子的生成和局部聚集，是進一步惡化疾病的重要因素，因此，抑制病理性血管新生是減緩上述疾病發(fā)生發(fā)展的重要策略。過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ)激動劑羅格列酮作為治療II型糖尿病的有效藥物，對血管新生有顯著的調(diào)控作用，可能成為治療血管新生相關疾病的潛在藥物，但是目前研究對羅格列酮和血管新生的關系存有較大爭議。另外，PPARγ激動劑羅格列酮在治療II型糖尿病時易造成組織水腫等與血管通透性相關的副作用，限制了羅格列酮等類似藥物的臨床應用�；诖�，本研究擬考察羅格列酮與血管新生和血管通透性的關系，旨在為羅格列酮安全有效地用于治療血管新生相關疾病提供理論指導。 主要研究結果如下： 第一部分：PPARγ激動劑羅格列酮對血管新生的影響和機制 ①結合斑馬魚在體血管新生模型、大鼠腹主動脈環(huán)離體血管新生模型、人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)體外血管新生模型綜合研究了PPARγ激動劑羅格列酮對血管新生的影響，結果顯示羅格列酮抑制了在體、離體和體外的血管新生，同時，，細胞實驗發(fā)現(xiàn)羅格列酮抑制HUVECs增殖和遷移。利用PPARγ拮抗劑GW9662預處理阻斷了羅格列酮誘導的系列效應，表明羅格列酮作用依賴于PPARγ的活化； ②在此基礎上，通過斑馬魚全胚原位雜交和熒光定量PCR分析得知羅格列酮處理后斑馬魚的VEGFR2(flk-1) mRNA表達下降，提示羅格列酮可能通過抑制VEGF/VEGFR2信號途徑發(fā)揮血管生成抑制作用。另外，通過細胞免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)羅格列酮刺激p53表達，流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)羅格列酮促進細胞凋亡，使用p53抑制劑Pifithrin-可阻斷羅格列酮誘導的促細胞凋亡、細胞遷移抑制和血管生成抑制作用，表明羅格列酮與PPARγ結合后通過激活p53信號通路促進了細胞凋亡，從而實現(xiàn)對血管新生的抑制作用。 第二部分：PPARγ激動劑羅格列酮對血管通透性的影響和機制 ①通過檢測羅格列酮對小鼠背部皮膚血管和HUVECs融合單層細胞的通透性的影響時發(fā)現(xiàn)，羅格列酮刺激血管通透性增加； ②在此基礎上，利用VEGF ELISA檢測羅格列酮對HUVECs分泌VEGF蛋白的影響時，發(fā)現(xiàn)羅格列酮抑制VEGF蛋白分泌，表明羅格列酮增加血管通透性不依賴VEGF的促血管通透性作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)PPARγ經(jīng)羅格列酮激活后可活化PI3K/eNOS/NO信號通路，重要的是，使用PPARγ拮抗劑GW9662、PI3K抑制劑Wortmannin和LY294002、eNOS抑制劑L-NAME均可阻斷羅格列酮刺激的血管通透性增加，提示PI3K/eNOS/NO信號通路參與調(diào)控羅格列酮誘導的血管通透性增加過程。
【關鍵詞】：過氧化物酶增殖物激活受體γ 羅格列酮 血管新生 血管通透性
【學位授予單位】：重慶大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 1 緒論10-22
• 1.1 問題的提出及研究意義10
• 1.2 病理性血管新生和血管通透性增高的地位10-18
• 1.2.1 血管新生過程10-11
• 1.2.2 血管新生促進腫瘤發(fā)生發(fā)展11-12
• 1.2.3 血管新生促進動脈粥樣硬化斑塊破裂12-13
• 1.2.4 血管新生過程中血管完整性和通透性的變化13-16
• 1.2.5 血管通透性變化的機制16-18
• 1.3 過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPARγ) 影響血管新生和血管通透性變化的研究進展18-21
• 1.3.1 PPARγ概述18
• 1.3.2 PPARγ在血管新生中的作用和爭議18-20
• 1.3.3 PPARγ在血管通透性變化中的可能作用20-21
• 1.4 本論文的研究目的和主要內(nèi)容21-22
• 1.4.1 本論文的研究目的21
• 1.4.2 本論文的主要內(nèi)容21-22
• 2 PPARγ激動劑羅格列酮抑制血管新生22-44
• 2.1 引言22-23
• 2.2 材料與方法23-29
• 2.2.1 主要儀器和試劑23
• 2.2.2 人臍帶靜脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)23-24
• 2.2.3 斑馬魚喂養(yǎng)和胚胎收集24
• 2.2.4 羅格列酮與胚胎共培養(yǎng)24
• 2.2.5 斑馬魚存活、孵化和心率等重要生理指標觀察24
• 2.2.6 斑馬魚血管新生檢測24-25
• 2.2.7 RNA 探針制備25
• 2.2.8 斑馬魚全胚原位雜交25-26
• 2.2.9 熒光定量 PCR26-27
• 2.2.10 大鼠腹主動脈血管環(huán)離體微血管生成實驗27
• 2.2.11 血管內(nèi)皮細胞體外血管新生實驗27
• 2.2.12 血管內(nèi)皮細胞增殖實驗27
• 2.2.13 血管內(nèi)皮細胞遷移實驗27-28
• 2.2.14 細胞凋亡檢測28
• 2.2.15 細胞免疫熒光染色28
• 2.2.16 統(tǒng)計分析28-29
• 2.3 實驗結果29-40
• 2.3.1 PPARγ激動劑羅格列酮(RSG)對斑馬魚存活率等重要生理指標的影響29-31
• 2.3.2 PPARγ激動劑羅格列酮抑制斑馬魚在體血管新生(in vivo angiogenesis)31-34
• 2.3.3 PPARγ激動劑羅格列酮抑制大鼠腹主動脈環(huán)離體血管新生(ex vivo angiogenesis)34-35
• 2.3.4 PPARγ激動劑羅格列酮抑制血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移和體外血管新生(in vitro angiogenesis)35-37
• 2.3.5 p53 誘導的細胞凋亡參與羅格列酮對血管新生的抑制作用37-40
• 2.4 討論40-43
• 2.4.1 斑馬魚作為血管新生模型的優(yōu)勢和適用性40-41
• 2.4.2 PPARγ及其配體與血管新生的關系41-42
• 2.4.3 PPARγ及其配體調(diào)控血管新生的機制42-43
• 2.5 小結43-44
• 3 PPARγ激動劑羅格列酮增加血管通透性44-59
• 3.1 引言44
• 3.2 材料與方法44-47
• 3.2.1 主要試劑和材料44-45
• 3.2.2 小鼠背部皮膚微血管通透性檢測45
• 3.2.3 血管內(nèi)皮細胞通透性檢測45
• 3.2.4 VEGF 分泌的 ELISA 檢測45-46
• 3.2.5 胞內(nèi) NO 生成的熒光探針檢測46-47
• 3.3 實驗結果47-55
• 3.3.1 PPARγ激動劑羅格列酮提高血管通透性47-51
• 3.3.2 PPARγ激動劑羅格列酮誘導的血管高通透性不依賴 VEGF51-52
• 3.3.3 PPARγ激動劑羅格列酮誘導的血管高通透性依賴于 PI3K/eNOS/NO 信號通路52-55
• 3.4 討論55-57
• 3.4.1 VEGF 及其受體在羅格列酮調(diào)控血管新生和血管通透性變化的作用55-56
• 3.4.2 PI3K/eNOS/NO 信號通路在羅格列酮調(diào)控血管新生和血管通透性變化的作用56-57
• 3.4.3 羅格列酮抑制血管新生卻增加血管通透性的臨床指導意義57
• 3.5 小結57-59
• 4 總結與展望59-61
• 4.1 總結59
• 4.2 展望59-61
• 致謝61-62
• 參考文獻62-71
• 附錄71
• A. 作者在攻讀學位期間發(fā)表的論文和專利71
• B. 作者在攻讀碩士學位期間曾參與的科研項目71

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本文編號：345530