本文關鍵詞：應用siRNA技術抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌LT基因表達的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的應用小干擾RNA(siRNA)技術抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)LT基因的表達。方法針對LT基因設計siRNAs序列,在ETEC培養(yǎng)過程中,將針對LT的siRNA、非特異性對照siRNA、陰性對照siRNA和LB培養(yǎng)基分別加入siRNA組(siRNA-LT1組、siRNA-LT2組)、siRNA-coa3組、siRNA-NC組和空白對照組,分3個時間點加入,每次1nmol。在首次加入siRNA后45min(A時間點)、90min(B時間點)、135min(C時間點)留取菌液,應用實時熒光定量PCR檢測上述3個時間點5組LT mRNA的表達水平。應用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測siRNA-LT1組、siRNA-LT2組和空白對照組在3個時間點的LT蛋白表達水平。結(jié)果實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,siRNA-LT1在A、B、C 3個時間點對LT mRNA表達的抑制率分別為70.9%、70.1%、72.5%,siRNA-LT2在A、B、C 3個時間點對LT mRNA表達的抑制率分別為70.1%、69.2%、70.5%,siRNALT1組、siRNA-LT2組對LT mRNA表達的抑制率與相應處理時間的siRNA-NC組、siRNA-coa3組、空白對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,siRNA-LT1和siRNA-LT2在A、B、C 3個時間點對LT蛋白表達的抑制率分別為43.1%、18.4%、5.0%和38.2%、15.4%、30.1%。結(jié)論針對LT基因設計合成的siRNA在體外能有效地抑制LT基因的表達。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;
【關鍵詞】： 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌 不耐熱腸毒素 小干擾RNA技術 RNA干擾
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81460322) 云南省內(nèi)設研究機構(gòu)科技計劃項目(2011WS0048)
【分類號】：R440
【正文快照】： 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是一種致病型的大腸埃希菌,全球每年因感染ETEC發(fā)生腹瀉的人數(shù)約為6.5億[1],在發(fā)展中國家,5歲以下兒童每年因感染ETEC發(fā)生腹瀉的人數(shù)約為2.1億,其中約有38萬因該疾病死亡[2]。目前,臨床治療ETEC感染性腹瀉的主要方法是應用抗菌藥物及補液。但隨著抗菌藥

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 湯瑾;蔣燕群;;KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯類耐藥中的研究[J];檢驗醫(yī)學;2010年12期

2 嚴燕國;詹文華;趙剛;馬晉平;蔡世榮;;CagA對幽門螺桿菌誘導胃黏膜上皮細胞分泌IL-8水平的影響[J];中國病理生理雜志;2006年04期

3 ;Effect of siRNAs on HSV-1 Plaque Formation and Relative Expression Levels of RR mRNA[J];Virologica Sinica;2011年01期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陳少芳;彭孝緯;;消化性潰瘍發(fā)病的分子機制及中醫(yī)藥治療探討[J];福建中醫(yī)學院學報;2007年01期

2 王琳琳;唐清;梁淡湄;姜海行;陸紅;;兒童幽門螺桿菌細胞毒素相關基因A檢測的意義[J];實用兒科臨床雜志;2006年19期

3 劉雄;張鳳嬌;李享;陳芳紅;房華麗;王琴;李濤;王慧;;KPC-2型碳青霉烯酶的表達純化及其催化抗生素水解的動力學[J];生物技術通訊;2013年05期

4 趙剛;嚴燕國;馬晉平;彭俊生;董文廣;蔡世榮;何裕隆;詹文華;;siRNA電轉(zhuǎn)化幽門螺桿菌抑制空泡毒素基因mRNA表達[J];中國病理生理雜志;2007年11期

5 邵圣文;張志智;顧紅光;王文琴;;RNA干擾銅綠假單胞菌群體感應系統(tǒng)對生物膜影響的研究[J];中國抗生素雜志;2009年03期

6 張強;薄惠;邢建華;王高峰;;單純皰疹病毒Ⅱ型ICP22真核表達載體的構(gòu)建及其對Vero細胞活性的影響[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2014年22期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張銳;穩(wěn)定表達靶向HSV2 VP16 shRNA重組細胞系的建立及其對HSV2復制能力影響研究[D];鄭州大學;2012年

2 王欣瑩;問號鉤端螺旋體鞭毛相關基因flhA、flhB和fliR突變株的構(gòu)建及其功能的初步研究[D];吉林大學;2006年

3 許彥梅;腸出血性大腸桿菌O157:H7 EDL933基因組島OI-172的功能研究[D];中國疾病預防控制中心;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳昊;靶向siRNA抑制金黃色葡萄球菌coa基因表達的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2012年

2 付瑞;應用siRNA技術抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌LT基因表達的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

3 張奉蓮;靶向siRNA體外抑制大鼠腎間質(zhì)成纖維細胞MAS基因表達的研究[D];瀘州醫(yī)學院;2013年

4 丁厚康;兔大腸桿菌病對血液指標和實質(zhì)器官的影響探討[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2013年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王錫琪;俞守義;張慧;楊先安;;應用大腸桿菌LT基因探針檢測幾種腸道菌LT的初步研究[J];中國公共衛(wèi)生;1987年05期

2 王錫琪;俞守義;張慧;楊先安;;應用大腸桿菌LT基因探針檢測幾種腸道菌LT的初步研究[J];廣后醫(yī)學;1988年01期

3 趙漢良;李景禧;王曉春;明建國;于美玲;;LT基因探針檢測毒素大腸桿菌的報告[J];中國公共衛(wèi)生學報;1990年06期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 付瑞;應用siRNA技術抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌LT基因表達的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2013年

  本文關鍵詞：應用siRNA技術抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌LT基因表達的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：345474