本文關(guān)鍵詞：MSCs的標(biāo)記跟蹤及其移植后對(duì)大鼠失神經(jīng)骨折病理性骨痂塑形影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的體外分離培養(yǎng)；觀察Brdu、 DAPI以及Hoechst33342體外染色的合適時(shí)間和最佳劑量,比較三種方法的優(yōu)缺點(diǎn),同時(shí)利用細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)失神經(jīng)骨折愈合中骨痂改變的影響。 方法：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)取自SD雄性大鼠(重量80g)的股骨和脛骨,然后采用貼壁分離培養(yǎng)法對(duì)BMSCs進(jìn)行分離培養(yǎng),當(dāng)BMSCs培養(yǎng)至第三代時(shí),采用流式細(xì)胞儀對(duì)其表面抗原(CD34, CD44, CD45)進(jìn)行測(cè)定；同時(shí)分別用Brdu、 DAPI以及Hoechst33342對(duì)BMSCs進(jìn)行染色標(biāo)記,Brdu標(biāo)記效果用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè),DAPI和Hoechst33342的標(biāo)記率用熒光顯微鏡觀測(cè),最后用MTT檢測(cè)BMSCs的細(xì)胞增值率,觀察三種不同方法體外染色的合適時(shí)間和最佳劑量,同時(shí)比較其優(yōu)缺點(diǎn)。上述實(shí)驗(yàn)完成后,選取3月齡雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為6組(n=8),A組為左脛骨骨折組,B組為T10脊髓橫斷+左脛骨骨折組,C組為T10脊髓橫斷+左脛骨骨折+自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組,D組為左脛骨骨折+DMEM組,E組為T10脊髓橫斷+左脛骨骨折(?)DMEM組,F組為左脛骨骨折+自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植組。術(shù)前15天取大鼠MSCS,采用Brdu標(biāo)記,C、F組模型建立2天后將標(biāo)記好的細(xì)胞以局部注射的方法移植到骨折斷端。術(shù)后對(duì)B、C、E組動(dòng)物進(jìn)行TARLOR評(píng)分；各組動(dòng)物于術(shù)后1、2、3、4周拍攝左脛骨DR并檢測(cè)、計(jì)算骨痂最大橫截面。 結(jié)果：流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BMSCs表達(dá)CD44陽性,CD34和CD45陰性；BMSCs染色前后其表面標(biāo)志物表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)；Brdu染色標(biāo)記的BMSCs最佳濃度和時(shí)間是10μmol/L48hours; DAPI染色標(biāo)記BMSCs的最佳濃度和時(shí)間是20μg/ml、30min; Hoechst33342染色標(biāo)記BMSCs的最佳濃度和時(shí)間是5μg/ml、1h。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：術(shù)后B、C、E組TARLOR評(píng)分均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求；Brdu標(biāo)記的BMSCs在移植后第3周仍然可見熒光標(biāo)記。術(shù)后1、2、3、4周各脛骨骨痂寬度：術(shù)后第1、2、3周,B、C、E組骨痂寬度較其余組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),術(shù)后第4周,C組骨痂寬度較B、E組下降,但B、C、E組較其他組仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：采用粘附貼壁分離培養(yǎng)法能夠有效的獲取高純度的BMSCs;運(yùn)用Brdu、 DAPI以及Hoechst33342三種方法標(biāo)記BMSCs效果良好,方法可靠、合理,為研究BMSCs體內(nèi)追蹤打下了基礎(chǔ)；大鼠脊髓橫斷合并脛骨干骨折后,骨折愈合速度加快,但骨痂的體積和其生物力學(xué)成負(fù)相關(guān),是一種病理性骨痂；大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植(BMSCs)改變了成骨潛能,促進(jìn)了病理性骨痂向正常骨痂的轉(zhuǎn)變,對(duì)失神經(jīng)骨折愈合有積極正向作用。
【關(guān)鍵詞】：流式細(xì)胞儀 表面標(biāo)志物 細(xì)胞分離 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 失神經(jīng) 骨折愈合
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R683;R329
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 中英文~.寫對(duì)照7-9
• 第一部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及其體外標(biāo)記跟蹤的實(shí)驗(yàn)研究9-26
• 引言9-10
• 材料與方法10-15
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料10-11
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法11-15
• 結(jié)果15-20
• 討論20-23
• 參考文獻(xiàn)23-26
• 第二部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠失神經(jīng)骨折病理性骨痂塑形影響的實(shí)驗(yàn)研究26-44
• 引言26-27
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法27-31
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料27-29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 結(jié)果31-36
• 討論36-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 結(jié)論44-45
• 文獻(xiàn)綜述45-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 讀研期間主要學(xué)術(shù)成果54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 法憲恩,王利霞,侯劍峰,張瑞成,王海永,楊辰垣;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性觀察[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年03期

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  本文關(guān)鍵詞：MSCs的標(biāo)記跟蹤及其移植后對(duì)大鼠失神經(jīng)骨折病理性骨痂塑形影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：343704