發(fā)布時間：2017-05-03 20:02

  本文關鍵詞：小鼠小腦皮質發(fā)育過程中細胞遷移與血管之間的相互作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：傳統(tǒng)理論認為未成熟的神經元主要是沿著放射狀膠質細胞遷移至最終目的地。放射狀膠質細胞是脊椎動物中樞神經系統(tǒng)發(fā)育過程中普遍存在的一種細胞，該細胞又稱伯格曼膠質細胞（Bergmann glia cell），為神經膠質細胞的一種，是胚胎時期的一類干細胞，在小腦皮質發(fā)育過程中，可以發(fā)育分化為星形膠質細胞和顆粒細胞。因此，放射狀膠質細胞在中樞神經系統(tǒng)中占據重要的角色，不僅可以引導神經細胞從室區(qū)向有絲分裂后區(qū)域遷移，同時又為新生神經細胞的遷移提供路徑和支架。但是最近越來越多的研究證明，中樞神經系統(tǒng)內的血管也參與了神經細胞的遷移。血管的主要功能是運輸一些氣體、營養(yǎng)物質、激素和循環(huán)細胞。神經系統(tǒng)內的血管有著廣泛的功能，比如胚胎早期的“血管龕室”可以為神經發(fā)生，神經細胞遷移以及軸突延伸等提供一個“微環(huán)境”。 目前，國內外對小腦皮質的發(fā)育主要集中于細胞形態(tài)和神經遞質方面，但是關于小腦皮質發(fā)育過程中，血管與細胞遷移之間的關系了解并不十分清楚。另外，有研究表明，小鼠神經鞘磷脂合成酶2基因敲除（sphingomyelin synthase2knockout, SMS2-/-）會造成體內神經酰胺的堆積，神經酰胺的堆積是否會影響小腦外顆粒層細胞的增殖，目前缺乏全面的報道。所以本研究將進一步為我們闡明中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育及發(fā)育相關的疾病提供重要的理論依據，同時也有助于臨床上一些視網膜神經組織與血液疾病的治療。 目的觀察小鼠小腦皮質片層化的組織發(fā)生過程和放射狀膠質細胞的分化；探討血管和放射狀膠質細胞以及細胞遷移之間的關系，同時分析神經酰胺堆積對小腦外顆粒層神經細胞增殖的影響。 方法本課題應用免疫熒光，BrdU抗體檢測技術配合墨汁灌注等技術對胚胎和出生后小鼠小腦皮質進行形態(tài)學觀察，對C57BL6J野生小鼠和神經鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠小腦皮質外顆粒層BrdU陽性細胞數和小腦皮質內血管體密度進行比較和測量。 結果①小腦片層化的形成：小鼠小腦的發(fā)育始于第四腦室側壁的菱唇，E10時，菱唇主要由神經上皮組成，至出生當日，小腦皮質形成了外顆粒層、分子層、浦肯野細胞層和顆粒層。隨著年齡的增長，發(fā)育至P3時，浦肯野細胞層排列紊亂，大約3-6層，此時，外顆粒層的細胞大量的遷移至內顆粒層。P10時，外顆粒層的細胞已經基本全部遷移至內顆粒層。大約在P22左右，小腦片層化完成，形成了三層典型結構：分子層、浦肯野細胞層和顆粒層。②細胞的遷移：大約在E15時，浦肯野細胞開始遷移，P7時，完成了它的遷移，排列成整齊的一層；同時，外顆粒層的細胞在P0時開始向內顆粒層遷移，發(fā)育至P10時，遷移基本停止。③放射狀膠質細胞的分化：E15時，小腦內出現大量的放射狀膠質細胞，，隨著小腦皮質的發(fā)育，大約在P14時，放射狀膠質細胞完全分化為星形膠質細胞。④小腦內血管和放射狀膠質細胞及細胞遷移的關系：墨汁灌注的方法顯示P0-P90小腦內血管體密度呈現逐漸上升的趨勢，由年齡和血管體密度相關性分析可知：相關系數為0.992, P 0.05，說明小鼠年齡和血管密度呈高度相關。E15-P7，小腦內血管和放射狀膠質細胞的走行和分布始終保持一致，分子層排列比較整齊，但是在顆粒層和白質內，血管和放射狀膠質細胞的走行和分布比較紊亂。另外，研究中還發(fā)現許多BrdU陽性細胞緊貼著血管遷移。⑤W T和SMS2-/-仔鼠對比：BrdU抗體可以特異性標記處于S期的增殖細胞，通過對WT和SMS2-/-仔鼠P0至P14時小鼠小腦皮質內BrdU陽性細胞密度的統(tǒng)計，發(fā)現BrdU陽性細胞密度無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義，P0.05；另外，兩種小鼠在形態(tài)結構，細胞遷移和血管發(fā)生方面均無顯著差異。 結論小鼠小腦片層化過程主要經歷了細胞增殖，分化和遷移。在小腦片層化形成的過程中，細胞遷移起著非常關鍵的作用，血管在小腦皮質內不僅和放射狀膠質細胞相互作用，引導神經細胞的遷移，并且為神經細胞的遷移提供路徑和支架；神經酰胺的堆積對小鼠小腦神經細胞的增殖無影響。
【關鍵詞】：小腦片層化 血管 細胞遷移 放射狀膠質細胞
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 引言11-13
• 1 材料、儀器與方法13-23
• 1.1 實驗動物13
• 1.2 實驗材料13-14
• 1.2.1 免疫組織化學試劑13-14
• 1.2.2 HE 染色所用試劑14
• 1.2.3 Nissl 染色所用試劑14
• 1.3 實驗試劑及配方14-16
• 1.4 主要儀器16-17
• 1.5 切片的制作17-18
• 1.5.1 石蠟切片17
• 1.5.2 震蕩切片17-18
• 1.6 HE 染色18
• 1.6.1 HE 染色原理18
• 1.6.2 HE 染色的步驟18
• 1.7 Nissl 染色18-19
• 1.7.1 Nissl 染色原理18-19
• 1.7.2 Nissl 染色的步驟19
• 1.8 免疫組織化學熒光染色19-20
• 1.8.1 免疫組織化學熒光染色原理19
• 1.8.2 免疫組織化學熒光染色步驟19-20
• 1.9 BrdU 標記增殖細胞技術20
• 1.10 墨汁灌注法20-21
• 1.11 BrdU 陽性細胞數和血管體密度的統(tǒng)計學處理21-23
• 2 實驗結果23-29
• 2.1 小腦皮質片層化的形成23
• 2.2 小腦內神經細胞的遷移23-24
• 2.3 放射狀膠質細胞的分化和組化特性24-25
• 2.4 小腦內血管和放射狀膠質細胞及細胞遷移之間的關系25-26
• 2.5 SMS2 基因對小腦外顆粒層增殖細胞的調控26-29
• 3 討論29-33
• 3.1 小腦皮質的發(fā)育及放射狀膠質細胞的分化29
• 3.2 血管與放射狀膠質細胞之間的相互誘導29-30
• 3.3 血管可以作為支架引導細胞遷移30-31
• 3.4 神經酰胺不參與調節(jié)小鼠小腦外顆粒層神經細胞的增殖31-33
• 結論33-35
• 參考文獻35-39
• 附圖39-42
• 圖版說明42-46
• 文獻綜述46-58
• 參考文獻54-58
• 附錄58-60
• 附錄 A 縮略語表58-59
• 附錄 B 攻讀碩士期間發(fā)表論文59-60
• 致謝60-61

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前5條

1 鄧錦波;徐曉波;范文娟;;小腦發(fā)育及其基因調節(jié)[J];解剖科學進展;2010年02期

2 程相樹;蔣杞英;胡艷秋;牛艷麗;李明善;于東明;鄧錦波;;小鼠小腦皮質的組織發(fā)生[J];解剖學雜志;2007年05期

3 劉孝華;喬建坤;熊國平;汪琳;;血管內皮生長因子及其受體mRNA在輸卵管妊娠蛻膜組織的表達[J];解剖學雜志;2008年03期

4 劉靜;郭文君;韓獻成;李文通;;內皮抑素對肝癌HepG-2細胞生長和血管內皮生長因子表達的影響[J];解剖學雜志;2009年02期

5 鄧同興;王志新;高曉群;石淵淵;馬戰(zhàn)友;金海嘯;鄧錦波;;酒精誘導小鼠海馬齒狀回神經細胞的增殖:神經酰胺的可能作用[J];生理學報;2011年06期

  本文關鍵詞：小鼠小腦皮質發(fā)育過程中細胞遷移與血管之間的相互作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：343627