發(fā)布時(shí)間：2021-10-12 06:47

　　[背景與目的]生殖細(xì)胞缺陷所致的男性不育癥是目前臨床難于攻克的疾病,傳統(tǒng)輔助生殖技術(shù)尚無法從根本上解決此類病人的生育問題,精原干細(xì)胞移植是突破這一瓶頸的理想途徑。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能,一定條件下可向三個(gè)胚層組織細(xì)胞分化,前期的研究表明,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體外誘導(dǎo)后表達(dá)部分生殖細(xì)胞標(biāo)記,移植到不育小鼠體內(nèi)不發(fā)生排斥反應(yīng),且可發(fā)生遷移并能存活至少120天。本研究將在前期研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)外向精原細(xì)胞的分化潛能及其生物學(xué)特性。[材料與方法]采用差異貼壁法分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增出人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記表達(dá)情況；利用新生小鼠睪丸細(xì)胞培養(yǎng)液、維甲酸、睪酮作為條件誘導(dǎo)液,將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在條件誘導(dǎo)液中培養(yǎng),顯微鏡觀察誘導(dǎo)前后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；RT-PCR、細(xì)胞免疫熒光檢測男性生殖細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記的表達(dá)；將人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植于不育小鼠睪丸內(nèi),RT-PCR檢測體內(nèi)移植細(xì)胞的生殖細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記的表達(dá)。[結(jié)果]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多能干細(xì)胞的生物學(xué)特性,高表達(dá)多能干細(xì)胞標(biāo)記CD44、CD29、CD59、OCT4;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在生殖細(xì)... 

【文章來源】：汕頭大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RT一PCR檢測HUMSCS在條件誘導(dǎo)液誘導(dǎo)下表達(dá)精原干細(xì)胞特異標(biāo)記;A:誘導(dǎo)后第3

圖gA:轉(zhuǎn)染PIREsZ一EGFP質(zhì)粒后綠色熒光蛋白在I側(cè)隊(duì)SCs中的表達(dá);B:移植1月后俐MSCs在不育小鼠翠丸內(nèi)定植，綠色為移植的扭服SCS，藍(lán)色為DAPI染色的小鼠翠丸細(xì)胞核。FiguregA:ExPressionofEGFPinHUMSCsafterlabeledwithPIRESZ一EGFP:B:HUMSCsapPearedinthetestesofreeiPientmieeafter1monthtransPlantation，transPlantedeellshowngreenandnucleiareshowninblue，DApl(4’，6’一diamidino一2一Phenylindole)staining.magnifieation:x2003.人生殖細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記在小鼠翠丸內(nèi)的表達(dá)將移植7天，30天及未移植細(xì)胞的小鼠肇丸取出，提取RNA，RT-PCR檢測到未移植的細(xì)胞及移植細(xì)胞7大后的小鼠翠丸不表達(dá)人的生殖細(xì)胞標(biāo)記，而移植了HUMSCSI月后的小鼠翠丸內(nèi)表達(dá)有人的生殖細(xì)胞標(biāo)記Stella、dazl(圖10)，人精子作為陽性對照。D八之LU7D.1陰SPMU7D，陰SPM

30天及未移植細(xì)胞的小鼠肇丸取出，提取RNA，RT-PCR檢測到未移植的細(xì)胞及移植細(xì)胞7大后的小鼠翠丸不表達(dá)人的生殖細(xì)胞標(biāo)記，而移植了 HUMSCSI月后的小鼠翠丸內(nèi)表達(dá)有人的生殖細(xì)胞標(biāo)記Stella、dazl(圖10)，人精子作為陽性對照。D八之L U7D.1陰 SPMU7D，陰SPM圖10將HUMSCs移植于不育小鼠翠丸后7天、1月取小鼠翠丸行Rf-PCR檢測人生殖細(xì)胞標(biāo)記stella、daZI表達(dá)情況，M(marker)、sP(人精子)、7D、IM(移植7大、l月)、u(未移植)。 Figure10Rf-PCRdetectedhumanmalegermeellmarkerstella、 dazlexPressedinthemice testesafter7dayand1month’ 5transPlantationofHUMSCs.M:marker， SP:humansPerm，7D:7day， IM:1month，U:untransPlant.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及向類肝細(xì)胞的分化[J]. 閆俊卿,韓濤,朱爭艷.  世界華人消化雜志. 2008(15)
[3]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島樣細(xì)胞的分化[J]. 王愛紅,何紅燕,羅敏潔,黃天華,馬廉,馬桂霞,林麗敏,林廣裕,史雪川.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(21)
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[5]臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在精原細(xì)胞培養(yǎng)條件下的生殖細(xì)胞特性[J]. 唐秋靈,何紅燕,林廣裕,林麗敏,謝慶東,黃天華,馬廉.  實(shí)用兒科臨床雜志. 2008(05)
[6]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的研究[J]. 林曉波,何紅燕,羅敏潔,崔冰琳,馮學(xué)永,蔣學(xué)武,謝慶東,黃天華,應(yīng)文娟,馬廉.  實(shí)用兒科臨床雜志. 2007(13)
[7]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的研究[J]. 馬廉,崔冰琳,馮學(xué)永,羅敏潔,蔣學(xué)武,楊立業(yè),謝慶東,黃天華.  中華兒科雜志. 2006(07)
[8]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠脊髓損傷神經(jīng)功能恢復(fù)的評價(jià)[J]. 王革生,張慶俊,韓忠朝.  中華神經(jīng)外科雜志. 2006(01)
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本文編號：3432079