發(fā)布時間：2017-05-02 02:04

  本文關(guān)鍵詞：篩選SHOX基因保守非編碼序列的增強(qiáng)元件，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的分析保守非編碼元件（Conserved noncoding DNAelements，CNEs）的具體定位、數(shù)量及篩選對SHOX(short stature homeoboxcontaining gene)基因具有增強(qiáng)活性的元件。 方法1.比較基因組學(xué)分析篩選SHOX基因PRA1所有CNEs；2.構(gòu)建含有不同CNEs的綠色熒光蛋白質(zhì)粒；3.將構(gòu)建好的不同CNEs質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞)，提取總RNA；4.用實(shí)時定量基因擴(kuò)增熒光檢測系統(tǒng)(Real-time Quantitative PCR Detecting System，QPCR）對各CNE轉(zhuǎn)染細(xì)胞后SHOX基因mRNA進(jìn)行相對定量；5.對QPCR得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 1.未轉(zhuǎn)染組（未對細(xì)胞進(jìn)行任何干預(yù)，即未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒）與對照組（加入不帶CNEs的空質(zhì)粒）進(jìn)行比較，P=0.96（0.05），無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，認(rèn)為未轉(zhuǎn)染組與對照組之間SHOX基因表達(dá)無差異。 2. CNE-4、CNE2、CNE3、CNE4、CNE5、CNE6、CNE7、CNE8、CNE12、CNE13、CNE14、CNE15與未轉(zhuǎn)染組相比得出的P值分別為0.706、0.942、1、1、0.416、0.109、0.416、0.838、1、0.108、0.866、0.932均大于0.05，也就是說CNE-4、CNE2、CNE3、CNE4、CNE5、CNE6、CNE7、CNE8、CNE12、CNE13、CNE14、CNE15與未轉(zhuǎn)染組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即以上CNEs干擾細(xì)胞后，對SHOX基因的表達(dá)量無影響。 3. CNE-5、CNE-3、CNE-2、CNE9、CNE10、CNE11與未轉(zhuǎn)染組比較得出的P值分別為.0001、.0001、.0001、0.015、0.01、0.007均小于0.05，也就是說以上CNE-5、CNE-3、CNE-2、CNE9、CNE10、CNE11六組與未轉(zhuǎn)染組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且該六組SHOX基因表達(dá)量高于未轉(zhuǎn)染組。 結(jié)論 運(yùn)用Bootstrap方法進(jìn)行多樣本的兩兩比較：1.未轉(zhuǎn)染組（未對細(xì)胞進(jìn)行任何干預(yù)，即未轉(zhuǎn)入質(zhì)粒）與對照組（加入不帶CNEs的空質(zhì)粒）進(jìn)行兩兩比較，P=0.96（0.05），無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，認(rèn)為未轉(zhuǎn)染組與對照組之間無差異。也就是說，質(zhì)粒對SHOX基因表達(dá)量是無任何影響的，排除了質(zhì)粒本身對細(xì)胞的影響，進(jìn)一步影響SHOX基因的表達(dá)；2.CNE-4、CNE2、CNE3、CNE4、CNE5、CNE6、CNE7、CNE8、CNE12、CNE13、CNE14、CNE15與未轉(zhuǎn)染組相比得出的P值分別為0.706、0.942、1、1、0.416、0.109、0.416、0.838、1、0.108、0.866、0.932均大于0.05，同樣無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，也就是說CNE-4、CNE2、CNE3、CNE4、CNE5、CNE6、CNE7、CNE8、CNE12、CNE13、CNE14、CNE15與未轉(zhuǎn)染組之間SHOX基因表達(dá)無差異，即以上CNEs干擾細(xì)胞后，對SHOX基因的表達(dá)量無影響；3.CNE-5、CNE-3、CNE-2、CNE9、CNE10、CNE11與未轉(zhuǎn)染組比較得出的P值分別為.0001、.0001、.0001、0.015、0.01、0.007均小于0.05，也就是說以上CNE-5、CNE-3、CNE-2、CNE9、CNE10、CNE11六組與未轉(zhuǎn)染組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且該六組SHOX基因表達(dá)量高于未轉(zhuǎn)染組，因此認(rèn)為以上六組（CNE-5、CNE-3、CNE-2、CNE9、CNE10、CNE11）對SHOX基因的表達(dá)具有增強(qiáng)作用，可作為增加子或者順式調(diào)控結(jié)合位點(diǎn)對SHOX基因進(jìn)行遠(yuǎn)距離調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：矮小同源盒基因（SHOX基因） 保守非編碼元件（CNEs） 綠色熒光蛋白質(zhì)粒 實(shí)時定量基因擴(kuò)增熒光檢測系統(tǒng)（QPCR）
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R346
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 1 方法14-33
• 2 結(jié)果33-37
• 3.討論37-40
• 4 結(jié)論40-42
• 全文小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 文獻(xiàn)綜述47-55
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況56-57

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本文編號：340050