發(fā)布時間：2017-05-01 19:05

  本文關(guān)鍵詞：基于T7啟動子表達系統(tǒng)的呼吸道合胞病毒微型基因組的拯救，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的以T7啟動子表達系統(tǒng)為基礎(chǔ)，通過RNA病毒反向遺傳學(xué)操作，拯救人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus, RSV）微型基因組。 方法構(gòu)建可分別表達RSV四種核殼體蛋白的輔助質(zhì)粒px8δT-PT1-N、px8δT-PT1-P、 px8δT-PT1-M2-1和px8δT-PT1-L以及含增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorecent protein, EGFP）開放讀碼框（open reading frame, ORF）、RSV病毒前導(dǎo)序列（leader region/genomic promotor）、轉(zhuǎn)錄起始信號（gene start,GS）、轉(zhuǎn)錄終止信號（gene end, GE）和尾隨序列（trailer region/antigenomic promoter）等順式作用元件（cis-acting elements）組成的微型反基因組重組質(zhì)粒pSC11-E，在上述的5個質(zhì)粒中，均引入T7RNA多聚酶（T7RNA polymerase, T7RNP）啟動子，經(jīng)鑒定正確后，先以pSC11-E轉(zhuǎn)染RSV感染的可組成型表達T7多聚酶的BSRT7/5細胞進行拯救，確定微型基因組編碼質(zhì)粒設(shè)計的合理性，，而后通過5個質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染BSR T7/5細胞，并通過熒光顯微鏡觀察熒光蛋白的表達情況判斷拯救是否成功。 結(jié)果RSV四種核殼體蛋白的輔助質(zhì)粒px8δT-PT1-N、 px8δT-PT1-P、px8δT-PT1-M2-1和px8δT-PT1-L轉(zhuǎn)染BSR T7/5細胞后，Western blot證實四種核殼體蛋白能順利表達，分別以RSV作為輔助病毒及可表達RSV四種核殼體蛋白的輔助質(zhì)粒實現(xiàn)了對pSC11-E的拯救。 結(jié)論成功構(gòu)建了基于T7啟動子表達系統(tǒng)的RSV微型基因組5質(zhì)粒拯救系統(tǒng)，該系統(tǒng)的成功構(gòu)建，有助于今后對RSV病毒開展基因修飾研究。
【關(guān)鍵詞】：呼吸道合胞病毒 微型基因組 反向遺傳學(xué) 拯救
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R373
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-9
• 實驗設(shè)計與流程9-10
• 前言10-12
• 實驗材料12-16
• 實驗方法16-39
• 結(jié)果39-43
• 討論43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-50
• 附錄50-51
• 致謝51-52
• 綜述52-63
• 參考文獻59-63

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本文編號：339464