本文關(guān)鍵詞：γδT細(xì)胞在急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型（水動(dòng)力法）中的變化分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：γδT細(xì)胞是一類(lèi)重要的非特異性免疫細(xì)胞。我們的前期研究表明，γδT細(xì)胞在慢性乙型肝炎患者中呈現(xiàn)表型及功能異常。而本課題將通過(guò)構(gòu)建急性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染小鼠模型，重點(diǎn)觀察肝臟內(nèi)γδT細(xì)胞的比例、激活表型及細(xì)胞因子表達(dá)的變化，，探討γδT細(xì)胞在HBV急性感染清除機(jī)制中的作用。擬為全面揭示γδT細(xì)胞在HBV感染早期及慢性化過(guò)程中的作用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.用尾靜脈高壓水動(dòng)力法注射HBV基因組1.3倍體真核表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1-HBV1.3)構(gòu)建急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型。 2.用免疫組化法檢測(cè)模型小鼠肝臟內(nèi)HBsAg及HBcAg的表達(dá)；用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)模型小鼠外周血內(nèi)HBsAg及HBeAg水平。 3.用流式細(xì)胞儀方法檢測(cè)pcDNA3.1-HBV1.3質(zhì)粒模型組（pHBV組）、pcDNA3.1對(duì)照質(zhì)粒組（pcDNA組）在質(zhì)粒注射后不同時(shí)間肝臟、脾臟及外周血中γδT細(xì)胞比例的變化。 4.用流式細(xì)胞儀方法檢測(cè)pHBV組肝臟中γδT細(xì)胞表面CD25與CD69激活分子表達(dá)的變化。 5.用流式細(xì)胞儀方法檢測(cè)pHBV組肝臟中γδT細(xì)胞內(nèi)IFN-γ及TNF-α細(xì)胞因子產(chǎn)生的變化。 6.用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析各時(shí)間點(diǎn)及各組間的差異。 結(jié)果： 1.急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型的構(gòu)建 1.1pHBV組血清中的HBsAg在第1天即為陽(yáng)性（33.64±14.88COI），到第5天上升到最高（146.92±24.23COI），而后逐漸降低。 1.2pHBV組血清中的HBeAg在第1天為陽(yáng)性并達(dá)峰值（2.26±2.34COI），然后降低。 1.3pHBV組肝臟內(nèi)表達(dá)HBsAg或HBcAg肝細(xì)胞的陽(yáng)性率在第1天為最高(10～20%)，而后迅速降低(＜5%)。 1.4pcDNA組的外周血及肝臟內(nèi)的HBV抗原在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均為陰性。 2.急性HBV感染小鼠模型肝臟、脾臟及外周血內(nèi)γδT細(xì)胞比例的變化 2.1正常對(duì)照小鼠（NC）肝臟中的γδT細(xì)胞比例（4.5±0.6％）明顯高于脾臟（2.1±0.3％）或外周血（1.2±0.6％），差異有顯著性（p0.01）。2.2pHBV組中，肝臟內(nèi)的γδT細(xì)胞的比例在第1天即升高至8.3±4.3％，而后降低，到第10天時(shí)，又升高至8.0±1.2％。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，pHBV1d的比例明顯高于NC，pHBV5d和pHBV15d的比例，差異有顯著性（p0.05）。 2.3pHBV組各時(shí)間點(diǎn)脾臟或外周血中的γδT細(xì)胞比例與NC比較未見(jiàn)有明顯的變化，差異無(wú)顯著性（p0.05）。 2.4pcDNA組中，小鼠肝臟、脾臟或外周血中的γδT細(xì)胞比例與NC比較差異無(wú)顯著性（p0.05）。 3.急性HBV感染小鼠模型肝臟內(nèi)γδT細(xì)胞CD25及CD69表達(dá)的變化 3.1NC肝臟中的CD25+γδT或CD69+γδT細(xì)胞比例分別為3.1±0.5％、9.9±2.7％。 3.2pHBV組小鼠肝臟內(nèi)CD25＋γδT細(xì)胞比例在第5天升高至最高8.4±3.7％，但各時(shí)間點(diǎn)間，及與NC間的差異無(wú)顯著性（p0.05）。 3.3pHBV組小鼠肝臟內(nèi)CD69+γδT細(xì)胞比例隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低，第10天的CD69+γδT細(xì)胞比例與其它時(shí)間點(diǎn)及NC比較差異有顯著性（p0.05）。 4.急性HBV感染小鼠模型肝臟的γδT細(xì)胞內(nèi)IFN-γ或TNF-α細(xì)胞因子表達(dá)的變化 4.1正常對(duì)照小鼠（NC）肝臟中的IFN-γ+γδT或TNF-α+γδT細(xì)胞比例分別為5.1±0.4％、4.7±0.6％。 4.2pHBV組第1天肝臟IFN-γ＋γδT細(xì)胞比例升高至8.6±3.2％，之后即刻降低,與其它時(shí)間點(diǎn)及NC比較，差異無(wú)顯著性（p0.05）。 4.3pHBV組肝臟內(nèi)TNF-α陽(yáng)性的γδT細(xì)胞比例隨著時(shí)間而緩慢上升，但各個(gè)時(shí)間點(diǎn)間或與NC間的差異無(wú)顯著性（p0.05）。 結(jié)論： 1.急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型構(gòu)建成功。 2.該模型小鼠的肝臟內(nèi)γδT細(xì)胞的比例、激活表型或細(xì)胞因子產(chǎn)生均發(fā)生了顯著性變化。 3.提示γδT細(xì)胞可能參與了急性HBV感染與清除過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：γδT細(xì)胞 乙型肝炎病毒 急性感染 非特異性免疫
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R512.6;R-332
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-17
• 1 材料17-21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25
• 4 結(jié)果25-35
• 5 討論35-38
• 全文總結(jié)38-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 文獻(xiàn)綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 ;The Roles of Innate Immune Cells in Liver Injury and Regeneration[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年04期

2 ;Therapeutic effect of autologous dendritic cell vaccine on patients with chronic hepatitis B: A clinical study[J];World Journal of Gastroenterology;2005年12期

  本文關(guān)鍵詞：γδT細(xì)胞在急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型（水動(dòng)力法）中的變化分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：339440