石英粉塵（簡(jiǎn)稱(chēng)石英）是我國(guó)最嚴(yán)重的職業(yè)危害因素之一,既可致矽肺,也可致癌。石英可誘導(dǎo)細(xì)胞周期改變,也可引起DNA雙鏈斷裂損傷（DNA double strand breaks, DSBs）。DNA損傷后,在信號(hào)分子介導(dǎo)下細(xì)胞周期發(fā)生阻滯,DNA損傷修復(fù)蛋白被激活進(jìn)行DNA損傷修復(fù)。DNA依賴(lài)性蛋白激酶（DNA dependent protein kinase, DNA-PK）是DSBs的傳感器之一,識(shí)別受損傷的DNA,磷酸化組蛋白H2AX,參與DSBs的非同源末端連接。DNA-PK由調(diào)節(jié)亞單位Ku和催化亞單位（DNA-PK catalytic subunit, DNA-PKcs）組成,Ku是Ku70與Ku80蛋白通過(guò)非共價(jià)鍵緊密結(jié)合形成的異二聚體結(jié)構(gòu)。以往研究表明,DNA-PK作為蛋白激酶可將多種重要的功能蛋白底物,如Akt、JNK、AP-1、p53等磷酸化,激活DNA損傷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進(jìn)修復(fù)相關(guān)因子的轉(zhuǎn)錄、引起細(xì)胞周期阻滯或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),Akt/JNK/AP-1信號(hào)通路可調(diào)節(jié)CyclinD1和CDK4表達(dá),參與石英誘導(dǎo)的細(xì)胞周期S期阻滯；DNA-PKcs具有D... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮寫(xiě)詞
前言
工作假說(shuō)
技術(shù)路線
第一部分 KU80對(duì)石英致DNA雙鏈斷裂修復(fù)及DNA-PK/JNK轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中信號(hào)分子的影響
    引言
    材料與方法
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 細(xì)胞系
            1.2 感受態(tài)細(xì)菌
            1.3 質(zhì)粒
            1.4 主要試劑
            1.5 主要設(shè)備與器材
            1.6 主要試劑配制
        2. 主要實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌
            2.2 小規(guī)模擴(kuò)增質(zhì)粒
            2.3 質(zhì)粒DNA的純化
            2.4 建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系
            2.5 Western blot實(shí)驗(yàn)方法
            2.6 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
            2.7 彗星實(shí)驗(yàn)
            2.8 微核實(shí)驗(yàn)
            2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    結(jié)果
        1 抑制Ku80表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體的建立及鑒定
            1.1 Ku80的siRNA質(zhì)粒
            1.2 Ku80的siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胚肺成纖維細(xì)胞
            1.3 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體的鑒定
        2 Ku80對(duì)石英致DSBs修復(fù)的影響
            2.1 Ku80與石英刺激劑量反應(yīng)關(guān)系和時(shí)間反應(yīng)關(guān)系
            2.2 Ku80對(duì)H2AX磷酸化的影響
            2.3 中性彗星實(shí)驗(yàn)
            2.4 微核實(shí)驗(yàn)
        3 Ku80對(duì)DNA-PK/JNK通路中信號(hào)分子表達(dá)及磷酸化的影響
            3.1 Ku 80與Ku 70、DNA-PKcs的關(guān)系
            3.2 Ku80對(duì)Akt、JNK、AP-1(側(cè)重c-Jun)的影響
        4 Akt、JNK、AP-1活性對(duì)γH2AX磷酸化水平的影響
    討論
        1. 建立Ku80的siRNA質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人胚肺成纖維細(xì)胞的細(xì)胞系
        2. Ku80表達(dá)對(duì)石英所致DSBs修復(fù)的影響
        3. Ku80表達(dá)對(duì)DNA-PK/JNK信號(hào)通路中信號(hào)分子表達(dá)及活化的影響
        4. Akt、JNK、AP-1活性對(duì)γH2AX磷酸化水平的影響
    小結(jié)
第二部分 KU80對(duì)石英誘導(dǎo)的細(xì)胞周期改變的影響
    引言
    材料與方法
        1. 細(xì)胞系
        2. 主要儀器和試劑
        3. 主要實(shí)驗(yàn)方法
        4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    結(jié)果
        1 Ku80表達(dá)對(duì)細(xì)胞周期的影響
            1.1 Ku80表達(dá)對(duì)石英誘導(dǎo)的細(xì)胞周期改變的影響
            1.2 Ku80對(duì)石英誘導(dǎo)的周期蛋白改變的影響
        2. CDK4、CyclinDl表達(dá)對(duì)石英致DSBs修復(fù)的影響
        3. DNA-PK/JNK通路及p53表達(dá)對(duì)CyclinE、CDK2表達(dá)的影響
            3.1 Ku80表達(dá)對(duì)石英誘導(dǎo)的CyclinE、CDK2水平的影響
            3.2 DNA-PKcs表達(dá)對(duì)石英誘導(dǎo)的CyclinE、CDK2水平的影響
            3.3 Akt、JNK及AP-1活性對(duì)石英誘導(dǎo)的CyclinE、CDK2水平的影響
            3.4 p53表達(dá)對(duì)石英誘導(dǎo)的CyclinE、CDK2水平的影響
    討論
    小結(jié)
第三部分 PI3K對(duì)石英致DNA雙鏈斷裂修復(fù)的影響
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
        1. PI3K對(duì)γH2AX磷酸化的影響
        2. PI3K對(duì)Ku70、Ku80和DNA-PKcs蛋白水平的影響
        3. PI3K對(duì)石英致DSBs修復(fù)的影響
    討論
    小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述:KU蛋白與DNA雙鏈斷裂修復(fù)關(guān)系的研究進(jìn)展
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3391220