目的建立cTnT^R141W擴張型心肌病的轉(zhuǎn)基因小鼠模型。方法把cTnT^R141W基因插入α-MHC啟動子下游,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因表達載體,通過顯微注射法建立cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因C57BL/6J小鼠。PCR鑒定cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因小鼠的基因表型,Realtime PCR檢測基因的拷貝數(shù),Northern blotting檢測基因表達,組織學(xué)和電鏡檢測cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因小鼠心臟的病理改變。免疫組織化學(xué)檢測突變的cTnT蛋白的定位。超聲心動圖檢測cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因小鼠心臟的結(jié)構(gòu)和功能。記錄cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因小鼠的生存狀況。逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟肥大分子標(biāo)志物。結(jié)果建立了3個系的cTnT^R141W轉(zhuǎn)基因小鼠。3個系的基因拷貝數(shù)分別是15、20和59拷貝。cTnT^R141W的表達水平是內(nèi)源性cTnT的1.5倍～2.0倍。cTnT

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

cTnTR，4’w基因在轉(zhuǎn)基因小鼠中的表達

四、cTnT“’4‘w轉(zhuǎn)基因小鼠心臟的病理表型將4月齡cTnTR川w轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠的心臟進行病理解剖，觀察到cTnT“’4‘w轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟明顯大于野生型小鼠的心臟(圖4A一B)。HE染色可見cTnTR，4’w轉(zhuǎn)基因小鼠全心擴大，室壁明顯變薄;高倍鏡下可見心肌細(xì)胞不均勻肥大(圖4C一F)，Masson染色可見。TnT“’4’w心肌間質(zhì)纖維明顯增多(圖4G一H)。

六、突變的cTnT蛋白的定位激光共聚焦掃描顯微鏡觀察顯示，突變的cTnT蛋白聚集在轉(zhuǎn)基因小鼠心臟的肌小節(jié)中(圖6)。圖6突變的cTnT蛋白的定位。A、野生型小鼠心臟;B、首建系 1cTnT“’4’w轉(zhuǎn)基因小鼠心臟。放大倍數(shù): x1500。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]cTnTR92Q轉(zhuǎn)基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立[J]. 董偉,馮娟,全雄志,陳煒,祝梅香,劉亞莉,張連峰.  中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2008(05)
[2]分子成像及其應(yīng)用[J]. 蔣星軍,任彩萍.  生命科學(xué). 2005(05)
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本文編號：3390920