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犬腺病毒1型疫苗株E3缺失表達(dá)載體的構(gòu)建

發(fā)布時(shí)間:2021-09-02 01:37
  人腺病毒被廣泛地作為基因轉(zhuǎn)移載體用于人類基因治療或制備成重組病毒疫苗。但人腺病毒有兩個(gè)主要缺點(diǎn),首先是大多數(shù)人曾經(jīng)感染過(guò)腺病毒,體內(nèi)存在針對(duì)該病毒的免疫應(yīng)答,這導(dǎo)致轉(zhuǎn)入的基因因已存在的免疫反應(yīng)而被逐漸清除,使得導(dǎo)入基因表達(dá)持續(xù)時(shí)間短。其次,即使只帶有極少人腺病毒包裝信號(hào)和反轉(zhuǎn)重復(fù)序列的人腺病毒載體也有和野生人腺病毒共復(fù)制的可能性,這就影響到其作為載體使用的安全性。這一切均限制了人腺病毒載體的應(yīng)用。動(dòng)物腺病毒能轉(zhuǎn)染人細(xì)胞,具備將外源基因轉(zhuǎn)移到人細(xì)胞內(nèi)的能力,人群中也不存在針對(duì)它們的免疫應(yīng)答,因此,開(kāi)發(fā)動(dòng)物腺病毒以代替人腺病毒作為基因轉(zhuǎn)移載體是一個(gè)很好的嘗試,至少它們能成為重組疫苗載體在各自種群中作出貢獻(xiàn)。已經(jīng)構(gòu)建成功的重組動(dòng)物腺病毒有重組牛腺病毒3型,豬腺病毒3型,羊腺病毒和犬腺病毒2型,F(xiàn)在我們又發(fā)展了一個(gè)新的極具重組疫苗和基因轉(zhuǎn)移載體潛力的動(dòng)物腺病毒——犬腺病毒1型疫苗株(Cannaught Laboratory Limited,CLL)。 在本室已構(gòu)建克隆有CLL DNA右末端59-100mu的質(zhì)粒p8基礎(chǔ)上,我們對(duì)CLL DNA的E3區(qū),pVⅢ基因和部分fiber基因進(jìn)行序... 

【文章來(lái)源】:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】:94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【部分圖文】:

犬腺病毒1型疫苗株E3缺失表達(dá)載體的構(gòu)建


本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的質(zhì)粒p日,含cLLDNA59一,00ou和〔3區(qū)

示意圖,缺失,路線,質(zhì)粒


cLLDNA〔3缺失載體構(gòu)建路線示意圖

電泳圖,酶切鑒定,質(zhì)粒,電泳圖


酶切鑒定(圖4):用質(zhì)粒上單一酶切位點(diǎn)Not工和P粒切成一條帶,大小約3.Ikb,證明其上連有Linker并酶切鑒定(圖5):用質(zhì)粒上單一酶切位點(diǎn)Pme工和No成一條帶,大小約15kb,證明克隆進(jìn)Linker。物對(duì)質(zhì)粒p10E3缺失部分測(cè)序分析,原約IO80PbBa部分缺失66Obp,并插入了有多克隆位點(diǎn)Pmel,Notl


本文編號(hào):3378052

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