本文關(guān)鍵詞：乙肝治療性DNA疫苗工程菌的建立和發(fā)酵培養(yǎng)基的初步優(yōu)化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究室前期自主研發(fā)了基于塞姆利基森林病毒(SFV)的復(fù)制子DNA疫苗載體系統(tǒng)(稱為可復(fù)制型DNA疫苗),已經(jīng)應(yīng)用于乙型肝炎、腫瘤等新型治療性DNA疫苗的研究。可復(fù)制型DNA疫苗pSVK-HBVA是基于該系統(tǒng)構(gòu)建的新型乙肝治療性DNA疫苗,初步藥效學(xué)實驗顯示：該疫苗能夠誘導(dǎo)高效細(xì)胞免疫應(yīng)答,降低轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)的HBV基因拷貝數(shù),取得了較為良好的免疫效果。為了推進(jìn)其進(jìn)一步的深入研究,目前已經(jīng)著手進(jìn)行該疫苗中試工藝的建立。本研究的主要工作是篩選質(zhì)粒pSVK-HBVA的最適宿主菌,并對攜帶pSVK-HBVA質(zhì)粒的工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行初步優(yōu)化。 首先,本研究進(jìn)行了質(zhì)粒pSVK-HBVA最適宿主菌的篩選。主要方法是：pSVK-HBVA質(zhì)粒轉(zhuǎn)化不同的感受態(tài)細(xì)胞,小量提取質(zhì)粒,凝膠電泳檢測質(zhì)粒形態(tài),通過連續(xù)傳代法進(jìn)行工程菌的穩(wěn)定性檢測。實驗結(jié)果顯示：大腸桿菌XL10-Gold為pSVK-HBVA的最適宿主菌。同時,按照2010版《中國藥典》三部的要求建立了攜帶質(zhì)粒pSVK-HBVA工程菌的三級種子批,并對種子批進(jìn)行了分子生物學(xué)和生物化學(xué)等鑒定。 然后,本研究對該工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了初步優(yōu)化：(1)將工程菌在LB、TB、M9(葡萄糖)、M9(甘油)四種培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),通過測定發(fā)酵菌體的干重和質(zhì)粒濃度,分別計算質(zhì)粒的容積產(chǎn)率和特異產(chǎn)率,選擇該工程菌的基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基。結(jié)果顯示：LB作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,能得到最高的質(zhì)粒容積產(chǎn)率。(2)通過在基礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基中分別添加不同的碳源和氮源,比較各種碳源和氮源對發(fā)酵產(chǎn)率的影響。結(jié)果顯示：0.5g/L的甘油作為碳源能得到較高的發(fā)酵產(chǎn)率,成本也較為低廉；10g/L的國產(chǎn)際蛋白胨代替OXOID公司的胰蛋白胨作為氮源能得到較高的發(fā)酵產(chǎn)率,也降低了成本。(3)在培養(yǎng)基中分別添加無機(jī)鹽、鹽酸硫胺素或微量元素進(jìn)行發(fā)酵,研究它們對質(zhì)粒產(chǎn)率的影響。實驗結(jié)果顯示：無機(jī)鹽和微量元素的添加對質(zhì)粒的產(chǎn)量有較為明顯的提高,而鹽酸硫胺素作用不明顯。 綜上,本研究對質(zhì)粒DNA疫苗pSVK-HBVA的宿主菌進(jìn)行了優(yōu)化篩選,獲得了能攜帶pSVK-HBVA的穩(wěn)定傳代30代的工程菌。通過對該工程菌的發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選和優(yōu)化,初步確定了既高產(chǎn)又經(jīng)濟(jì)的培養(yǎng)基成份,為對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化奠定了一定的實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：質(zhì)粒DNA疫苗 中試 宿主菌 發(fā)酵培養(yǎng)基
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-15
• 參考文獻(xiàn)11-15
• 第一部分 pSVK-HBVA穩(wěn)定宿主菌的篩選15-25
• 1.實驗材料15-17
• 2.實驗方法17-19
• 3.實驗結(jié)果19-22
• 4.討論22-23
• 5.參考文獻(xiàn)23-25
• 第二部分 攜帶pSVK-HBVA質(zhì)粒工程菌三級種子批的建立及鑒定25-37
• 1.實驗材料25-27
• 2.實驗方法27-32
• 3.實驗結(jié)果32-34
• 4.討論34-35
• 5.參考文獻(xiàn)35-37
• 第三部分 工程菌E.coli HBVA發(fā)酵培養(yǎng)基的初步優(yōu)化37-55
• 1.實驗材料37-43
• 2.實驗方法43-44
• 3.實驗結(jié)果44-52
• 4.討論52-54
• 5.參考文獻(xiàn)54-55
• 總結(jié)55-56
• 致謝56-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文57-58
• 英文縮略詞表58-59
• 綜述59-68
• 參考文獻(xiàn)65-68

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 郭妍;惠長野;;多表位HBV DNA疫苗的中試制備及質(zhì)量研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2009年01期

2 何曉嬙 ,陳光明,黃英,楊富強(qiáng),吳樂園,莫國玉;治療型雙質(zhì)粒HBV DNA疫苗的構(gòu)建及其鑒定[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2003年06期

3 王建設(shè),朱啟昒,張婷,俞蕙;粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子聯(lián)合乙肝疫苗治療宮內(nèi)乙型肝炎病毒感染慢性攜帶兒童的研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年12期

  本文關(guān)鍵詞：乙肝治療性DNA疫苗工程菌的建立和發(fā)酵培養(yǎng)基的初步優(yōu)化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：337479