本文關(guān)鍵詞：MBL調(diào)節(jié)白假絲酵母菌誘導(dǎo)DC成熟及分泌細(xì)胞因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannan-binding lectin, MBL)是由肝細(xì)胞分泌的血漿蛋白,為C型凝集素超家族中膠凝素家族成員。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)是體內(nèi)最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell, APC),是獲得性免疫應(yīng)答的直接介導(dǎo)者。已經(jīng)報(bào)道MBL不僅可以直接誘導(dǎo)DC分化成熟,而且高濃度MBL還可抑制脂多糖誘導(dǎo)的DC成熟。但是至今為止,關(guān)于白假絲酵母菌(Candida albicans, C.albicans)誘導(dǎo)DC成熟及MBL對(duì)這種免疫效應(yīng)是否有調(diào)節(jié)作用并無(wú)報(bào)道。因此,深入研究MBL對(duì)C. albicans誘導(dǎo)DC成熟的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制,具有重要意義。 目的 分析MBL對(duì)C. albicans誘導(dǎo)DC分化成熟及分泌細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用,并初步探討其調(diào)控機(jī)制。 方法 1.細(xì)胞培養(yǎng)：Ficoll密度梯度離心法分離人PBMC,貼壁法分離Mo,將Mo在含100μg/L rhIL-4和rhGM-CSF的無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)5d,誘導(dǎo)Mo向imDC分化,加入不同濃度MBL及C.albicans繼續(xù)培養(yǎng)2-4d,刺激imDC成熟,以人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)和TNF-α作為對(duì)照。每三天半量換液一次,并補(bǔ)加相應(yīng)的rhIL-4和rhGM-CSFα 2.CD分子檢測(cè)：收集各培養(yǎng)組DC,流式分析DC表面與DC成熟相關(guān)的CD83、 CD86分子的表達(dá)。 3.細(xì)胞因子檢測(cè)：收集各培養(yǎng)組DC上清液,ELISA檢測(cè)C.albicans誘導(dǎo)的TNF-α、IL-8、IL-6和IL-1p等細(xì)胞因子的分泌水平。 4.細(xì)胞結(jié)合實(shí)驗(yàn)：將imDC和C.albicans分別用含不同濃度Ca2+的結(jié)合緩沖液重懸,加入FITC-MBL,37℃避光反應(yīng)30min,FACS分析MBL與imDC的結(jié)合情況及MBL結(jié)合C.albicans的情況。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,并用單因素方差分析和獨(dú)立樣木t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.01為差異具有顯著性。 結(jié)果 1.200×倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn),加rhIL-4和rhGM-CSF培養(yǎng)3-5d,細(xì)胞呈不規(guī)則形態(tài),懸浮細(xì)胞增多,培養(yǎng)7d后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),且細(xì)胞膜伸出樹(shù)根樣突起。 2.與空白細(xì)胞組比較,C.albicans刺激組DC表面CD83.CD86表達(dá)均顯著增多,TNF-a刺激組CD83、CD86表達(dá)量也顯著增多,兩組無(wú)明顯差異,提示C.albicans可誘導(dǎo)DC分化成熟；而與C.albicans刺激組比較,C.albicans+MBL刺激組CD83、CD86表達(dá)明顯減少,而Calbicans+HSA刺激組則無(wú)明顯變化,提示高濃度MBL可抑制C.albicans誘導(dǎo)的DC成熟。 3.低濃度MBL(生理濃度)對(duì)C.albicans刺激DC分泌TNF-α、IL-8、IL-6及IL-1β無(wú)作用,高濃度MBL(超生理濃度)則對(duì)上述細(xì)胞因子的分泌有抑制作用,且呈濃度依賴性。 4.MBL均可與imDC及C.albicans結(jié)合,且這種結(jié)合具有Ca2+濃度依賴性。 結(jié)論 高濃度MBL抑制C.albicans誘導(dǎo)DC分化成熟,且MBL能夠以濃度依賴方式抑制C. albicans刺激DC分泌細(xì)胞因子,這種調(diào)節(jié)作用與MBL的配體結(jié)合作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：甘露聚糖結(jié)合凝集素 白假絲酵母菌 樹(shù)突狀細(xì)胞 細(xì)胞因子 免疫調(diào)節(jié)
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料12-18
• 方法18-23
• 結(jié)果23-29
• 討論29-32
• 小結(jié)32-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述：MBL調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的研究新進(jìn)展37-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 附錄47-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況49-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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2 王明永;甘露聚糖結(jié)合凝集素調(diào)節(jié)獲得性免疫應(yīng)答的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

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本文編號(hào)：337380