本文關(guān)鍵詞：布魯氏菌外膜蛋白OMP31在細(xì)胞凋亡中的調(diào)控研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：布魯氏菌（Brucella）是一種可導(dǎo)致人及多種動物急性、慢性感染的革蘭氏陰性、兼性胞內(nèi)寄生菌。巨噬細(xì)胞是布魯氏菌生存和繁殖的靶細(xì)胞，布魯氏菌不但可寄生于巨噬細(xì)胞并可抑制其凋亡，布魯氏菌外膜蛋白OMP31在布魯氏菌的毒力及胞內(nèi)寄生中均起重要作用，因此本研究欲構(gòu)建布魯氏菌omp31基因缺失株，，以巨噬細(xì)胞為研究對象探討布魯氏菌外膜 蛋白OMP31在巨噬細(xì)胞凋亡中不同階段的作用。方法：本研究用PCR方法分別擴增omp31基因的側(cè)翼序列及枯草芽孢桿菌SacB基因，利用雙酶切的方法分別將三個片段連入自殺載體pGEM-7zf+，獲得亞克隆pGEM-7zf+-omp31-SacB。將所構(gòu)建好的自殺載體通過電轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入布魯氏菌16M感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)兩次同源重組后篩選出16M omp31基因缺失株，對獲得缺失株進行遺傳穩(wěn)定性檢測及細(xì)菌學(xué)性質(zhì)鑒定。分別收集2h、4h、8h、12h、24h不同時間段利用親本株及缺失株侵染的小鼠巨噬細(xì)胞，利用流式細(xì)胞儀檢測其不同時間段早期凋亡率；采用雙抗體夾心ELISA的方法測定小鼠巨噬細(xì)胞不同時間段釋放CytC以及細(xì)胞因子TNF-α的情況；通過QRT-PCR技術(shù)檢測不同時間段TNF-α、Bax、Bcl-2mRNA表達量的變化。 結(jié)果：(1)成功獲得16M omp31基因缺失株，在15代內(nèi)未發(fā)生回復(fù)性突變說明缺失株具有遺傳穩(wěn)定性，細(xì)菌學(xué)性質(zhì)鑒定表明其為布魯氏菌羊種1型；(2)流式細(xì)胞儀檢測表明缺失株明顯促進感染巨噬細(xì)胞早期凋亡；(3)ELISA結(jié)果表明除2h外其他各時間點缺失株侵染的巨噬細(xì)胞釋放的Cytc均高于親本株侵染的巨噬細(xì)胞釋放的Cytc；而各時間點缺失株侵染的巨噬細(xì)胞釋放的TNF-α均高于親本株；(4)利用QRT-PCR檢測兩者TNF-α mRNA表達量各時間點均處于上調(diào)，Bax mRNA表達量除4h外各時間點均處于上調(diào)，Bcl-2mRNA表達量除2h外，各時間點均處于下調(diào)。 結(jié)論：(1)成功構(gòu)建布魯氏菌16MΔomp31基因缺失株，缺失株可穩(wěn)定遺傳并未發(fā)生細(xì)菌學(xué)性質(zhì)改變；(2)布魯氏菌外膜蛋白OMP31參與了布魯氏菌抑制感染細(xì)胞凋亡的過程；(3)omp31能通過調(diào)控凋亡通路中TNF-α、CytC、Bax、Bcl-2的表達量從而控制感染巨噬細(xì)胞的凋亡，本研究可為今后研究布魯氏菌抗凋亡機制及慢性布病患者的藥物選擇奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：布魯氏菌 omp31基因 缺失株 巨噬細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R378.5
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 主要符號表9-10
• 引言10-12
• 第一章 羊種布魯氏菌 16M 標(biāo)準(zhǔn)株 omp31 基因缺失株的構(gòu)建及穩(wěn)定性檢測12-33
• 摘要12
• 1 材料與方法12-20
• 1.1 材料12-13
• 1.2 方法13-20
• 2 結(jié)果20-31
• 2.1 同源重組質(zhì)粒 pGEM-7zf+-Δomp31-SacB 的構(gòu)建20-26
• 2.2 SacB 基因活性檢測26-27
• 2.3 布魯氏菌特異性檢測27
• 2.4 同源重組的篩選27-29
• 2.5 布魯氏菌 16MΔomp31 遺傳穩(wěn)定性檢測29-30
• 2.6 16MΔomp31 常規(guī)細(xì)菌學(xué)鑒定結(jié)果30-31
• 3 討論31-32
• 4 小結(jié)32-33
• 第二章 比較布魯氏菌 16M 及 16MΔomp31 對小鼠巨噬細(xì)胞早期凋亡的影響33-46
• 摘要33-34
• 1 材料與方法34-37
• 1.1 材料34
• 1.2 方法34-37
• 2 結(jié)果37-43
• 2.1 布魯氏菌 16M 及 16MΔomp31 侵染巨噬細(xì)胞早期凋亡的流式分析37-38
• 2.2 ELISA 檢測巨噬細(xì)胞釋放 Cytc38-39
• 2.3 ELISA 檢測巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子 TNF-α39-40
• 2.4 QRT-PCR 檢測巨噬細(xì)胞 TNF-α、Bax、Bcl-2 mRNA 表達量40-43
• 3 討論43-46
• 4 小結(jié)46
• 5 展望46
• 參考文獻46-48
• 文獻綜述 布魯氏菌外膜蛋白的研究進展48-67
• 參考文獻60-67
• 致謝67-68
• 附錄68-70
• 作者簡介70-71
• 導(dǎo)師評閱表71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：336224