本文關(guān)鍵詞：畢赤酵母STE13基因敲除對(duì)GGH表達(dá)及其生物活性的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:重組畢赤酵母GS115/pPIC9K-GGH表達(dá)的人胰高血糖素樣肽-1-人血清白蛋白融合蛋白[(GLP-1 A2G)2-HSA,GGH]的細(xì)胞活性測(cè)評(píng)結(jié)果顯示生物活性較低,這可能與其表達(dá)過程中蛋白降解有一定關(guān)聯(lián)。通過對(duì)畢赤酵母GS115 STE13基因的敲除,獲得一株完整表達(dá)蛋白GGH的畢赤酵母宿主,并進(jìn)一步提高其表達(dá)產(chǎn)物GGH的生物活性。方法:采用基于PCR技術(shù)介導(dǎo)的Cre-Loxp系統(tǒng)重組技術(shù)成功敲除宿主菌GS115的STE13基因,得到一株STE13缺陷型菌株GS115/D13,并通過細(xì)胞活性測(cè)評(píng)系統(tǒng)檢測(cè)GS115/D13表達(dá)產(chǎn)物GGH的生物活性。結(jié)果:通過對(duì)STE13基因缺陷型菌株GS115/D13與出發(fā)菌株GS115/W發(fā)酵表達(dá)對(duì)比,顯示GS115/D13菌株表達(dá)融合蛋白GGH生物活性有明顯提升,且表達(dá)量提高了25.8%,兩菌株生長(zhǎng)無明顯差異。結(jié)論:STE13基因的敲除成功緩解了GGH表達(dá)過程中的降解問題,并相對(duì)出發(fā)菌株GS115/W大幅度提高了蛋白生物活性。
【作者單位】： 江南大學(xué)藥學(xué)院制藥工程實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 畢赤酵母 GLP- STE 生物活性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31000016) 江蘇省科技支撐計(jì)劃(BE2009629)
【分類號(hào)】：Q78
【正文快照】： 胰高糖素樣多肽-1(Glucagon-like peptide-1,GLP-1)是由腸道L細(xì)胞合成和分泌的30肽,不僅具有保護(hù)胰島β細(xì)胞并抑制其凋亡、促進(jìn)胰島素合成和分泌的作用,還可作用于胰島α細(xì)胞,強(qiáng)烈抑制胰高血糖素的釋放,此外還可以作用于胰島δ細(xì)胞,促進(jìn)生長(zhǎng)抑素的分泌,而后者又可作為旁分泌

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本文編號(hào)：334969